Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Micobactérias
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I. Determinação da concentração mínima inibitória de antimicrobianos para cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis em até 24h.
II. Detecção da susceptibilidade ou da resistência a antimicrobianos de cepas clínicas Mycobacterium tuberculosis sem a multiplicação do microrganismo.
III. Determinação da concentração mínima inibitória de antimicrobianos para patógenos localizadas no interior de células fagocíticas.
Assinale:
I. Os estudos taxonômicos envolvendo a filogenia entre membros de MCR têm sido baseados na análise de sequências dos genes 16S rRNA, 23S rRNA, hsp65 e aquele codificante para RNA polimerase.
II. A técnica de hibridização DNA-DNA consiste na metodologia de maior acurácia na determinação de espécies de MCRs, apesar de ser laboriosa e atualmente realizada em centros de referência internacionais, justificando a busca de alternativas por diferentes laboratórios de pesquisa.
III. Os complexos taxonômicos descritos para MCRs consistem em (i) Grupo M. fortuitum, composto por M. fortuitum, M. peregrinum, M. mucogenicum e M. senegalense; (ii) Grupo M. chelonae-M. abscessus, composto pelas espécies M. chelonae, M. abscessus, M. bolletii, M. massiliense e M. immunogenum; e (iii) Grupo M. smegmatis, constituído por M. smegmatis, M. goodii e M. wolinskyi.
Assinale:
I. O teste semi-quantitativo da catalase classifica as micobactérias em dois grupos: produtores de catalase em baixos níveis e produtores de catalase em altos níveis, baseados na altura da coluna de bolhas de gás oxigênio formada após cinco minutos da adição do reagente em temperatura ambiente.
II. A maioria das micobactérias produz catalase em quantidade detectável, exceto cepas de M. tuberculosis, resistente a isoniazida, e M. bovis.
III. O complexo M. tuberculosis pode ser separado das demais micobactérias por apresentar catalase inativada pela temperatura acima de 68°C.
Assinale:
I. As técnicas baseadas apenas em reação de polimerização em cadeia com iniciadores específicos para as deleções genômicas RD de M. tuberculosis como RD1, RD4, RD9, RD12, discriminam as espécies M. tuberculosis e M. bovis (incluindo a espécie M. bovis BCG) bem como outras espécies do complexo.
II. Espécies do complexo M. tuberculosis podem ser diferenciadas pelo teste AccuProbe (GenProbe Inc., San Diego, California, EUA), que consiste em sondas marcadas com éster de acridina. Esse mesmo sistema pode também ser aplicado na identificação de cepas do complexo M. avium e M. kansasii.
III. Os sistemas INNO-LiPA Mycobacteria version 2 (Innogenetics, Ghent, Bélgica) GenoType Mycobacteria (Hain Lifescience, Nehren, Alemanha) consistem em hibridização reversa de produtos de reação de polimerização em cadeia biotinilados aos seus fragmentos complementares presentes em “tiras" de membrana. Ambos permitem a identificação molecular de acima de 10 espécies de micobactérias. Uma desvantagem do sistema é a impossibilidade de uso em cepas cultivadas em meios líquidos.
Assinale:
Crescimento ótimo a 25 e 35°C, teste de niacina negativo,produção de arilsulfatase após 3 e 15 dias e de urease,redução positiva de nitrato, produção de pigmentação, após exposição à luz, ausência de crescimento em ágar nutriente,em meio de Sauton contendo ácido pícrico, ou em meiocontendo NaCl a 5%, ausência de produção de β-galactosidase, e redução negativa do telurito.
Sobre a espécie correspondente à descrição fenotípicaacima, assine a alternativa correta.
I. Os pares M. kansasii e M. gastri, M. ulcerans e M. marinum, M. shimoidei e M. triviale, e M. abscessus e M. chelonae não podem ser diferenciados por sequências do gene rrs.
II. Em cepas cultivadas em meio sólido, a extração de DNA e a reação de polimerização em cadeia, para posterior sequenciamento gênico, apresentam resultados reprodutíveis e de precisão superior àqueles realizados a partir de cepas cultivadas em meio líquido.
III. Para a identificação de espécies de micobactérias não tuberculosas de crescimento rápido, os alvos incluem os genes dnaJ, hsp65, gyrB, 16S rDNA, secA1, sod ou a sequência ITS 16S-23S.
Assinale:
As suspensões foram incubadas a 37°C por 30 min e analisadas a 488nm com FACScam flow cytometer (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) utilizando FAC Scan Lysys II software para a acquisição de dados e análise. Os gráficos resultantes estão na figura abaixo.

Legenda da Figura: Os números nos eixos y e x de cada painel são 100 , 101 , 102 , 103 e 104 , respectivamente.
Usando seus conhecimentos de citometria de fluxo e micobacteriologia laboratorial, assinale a alternativa correta.
Sobre os detalhes técnicos para a metodologia citada quando aplicada para espécime clínico do tipo escarro espontâneo e de forma direta, analise as seguintes afirmativas.
I. O número mínimo de BAAR necessário para produzir um esfregaço com resultado positivo é estimado entre 100 a 1000 por mililitro (probabilidade de 50% de resultado positivo).
II. A Secretaria de Vigilância em Saúde do Ministério da Saúde recomenda, para o preparo do esfregaço, o uso de Bico de Bunsen ou Cabine de Segurança Biológica, de luvas e de outros Equipamentos de Proteção Individual, em área exclusiva apropriada, sem circulação de pessoas, sem correntes de ar, e com exaustor contendo renovação do ar (seis a 10 renovações por hora).
III. A técnica mundialmente utilizada consiste na coloração do esfregaço pelo método de Ziehl-Neelsen sob metodologia padronizada e observação em microscopia de campo claro com uso de óleo mineral e aumento total de 100X.
Assinale:
No diagnóstico bacteriológico, as micobactérias são Grampositivas fracas, sendo então submetidas a procedimentos que permitem a detecção de sua resistência a álcool-ácido. Essa propriedade, presente em outros gêneros bacterianos, pode levar ao diagnósitico impreciso, devendo ser confirmado por cultura e por identificação definitiva.
Considerando os princípios da baciloscopia, assinale a alternativa incorreta.

Com base nos achados ilustrados acima, sobre as interpretações finais dos exames baciloscópicos dos escarros do paciente, assinale a alternativa correta.
I. As principais espécies de micobactérias de crescimento rápido podem ser diferenciadas com os testes de produção de pigmentação, de crescimento em Löwestein-Jensen contendo ácido p-nitrobenzóico, de inibição do crescimento em meio de Sauton contendo ácido pícrico, em ágar nutriente, em meio com NaCl a5%, produção de pirazinamidase, de produção de arilsulfatase (3 e 15 dias), hidrólise de Tween 80, de produção de β-galactosidase, de redução do telurito de potássio, de redução de nitrato, de produção de urease,de crescimento a 25°C e de crescimento a 45°C.
II. O método PRA-hsp65 é baseado em metodologia molecular e deve ser combinado com avaliação das cepas de micobactérias por testes fenotípicos tais como os de morfologias macro- e microscópica da cultura micobacteriana, de pigmentação fotorreativa, de inibição do crescimento em meio contento ácido p-nitrobenzóico, de inibição do crescimento em meio contendo NaCl a 5%, de avaliação das temperaturas de crescimento, de crescimento em ágar nutriente, e teste de inibição do crescimento em meio de Sauton contendo ácido pícrico.
III. As espécies do complexo M. tuberculosis exibem alta similaridade fenotípica e não são distinguíveis pelos testes fenotípicos disponíveis.
Assinale:
I. As espécies M. tuberculosis e M. bovis apresentam padrões indistinguíveis.
II. No processo de análise por HPLC, os ésteres de ácidos micólicos são separados em coluna de fase reversa através de gradiente, e detectados por espectrometria UV.
III. Um extrato preparado a partir de cultura com M. fortuitum ATCC 6841 é recomendado para utilização como controle positivo e serve como padrão de referência para nomeação de picos obtidos na análise por espectrometria.
Assinale: