Questões de Técnicas em Laboratório - Microbiologia nas Técnicas em Laboratório para Concurso - Página 52

Q575522

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biologia Molecular de Microorganismos |

Q575522 Técnicas em Laboratório

A superexpressão de uma proteína heteróloga em Escherichia coli pode ser obtida:

A

com uma construção com o promotor do gene de interesse fusionado ao gene da RNA polimerase do bacteriófago T7.

B

com uma construção com o promotor reconhecido pela RNA polimerase do bacteriófago T7 controlando a expressão do gene de interesse.

C

apenas com construções que incluam genes bacterianos.

D

para genes eucariotos desde que as regiões de íntrons estejam incluídas.

E

com uma construção com o promotor reconhecido pela RNA polimerase do bacteriófago T7 controlando a expressão do gene de interesse, apenas se esta E. coli estiver infectada com o vírus T7 íntegro.

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Q575521

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biologia Molecular de Microorganismos |

Q575521 Técnicas em Laboratório

A expressão de um gene de virulência bacteriano pode ser:

A

regulada ao nível transcricional, traducional ou pós-transcricional.

B

regulada por um sistema de transdução de sinal de dois componentes apenas se estiver incluída num óperon sensível às concentrações de fosfato do meio ou à densidade celular.

C

envolvida por várias proteínas regulatórias que se ligam em regiões vizinhas do promotor para interagir com os ribossomos.

D

controlada ao nível traducional pela subunidade Sigma da RNA polimerase.

E

controlada ao nível transcricional pela subunidade 16S rRNA do ribossomo ao se ligar na subunidade Sigma da RNA polimerase.

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Q575520

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biologia Molecular de Microorganismos |

Q575520 Técnicas em Laboratório

Em um experimento em um laboratório, uma linhagem “A" de Escherichia coli, com plasmídeo com o gene da betalactamase (de resistência à Ampicilina - “Ap") e com oriT como uma de suas características, foi eletroporada com um outro plasmídeo contendo as funções “Tra" e um gene de resistência à cloranfenicol (Cm). A linhagem “A" (Ap^RCm^R) foi mantida, por algumas gerações, em meio sem seleção com uma linhagem “B" com um plasmídeo com gene de resistência à Tetraciclina (Tc) e sem origem ou funções de transferência. Para responder a questão, considere que as linhagens não apresentam funções de transferência em seus cromossomos e que não houveram eventos de recombinação ou mutação gerando ou destruindo funções de resistência.

Não será esperado observar (considere ^R = resistente e ^S = sensível) células:

A

“A" Ap^RCm^R.

B

“B" Tc^R.

C

“B" Tc^RAp^R.

D

“A" Ap^RTc^R.

E

“B" Ap^R.

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Q575519

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biologia Molecular de Microorganismos |

Q575519 Técnicas em Laboratório

O composto di-desoxiribonucleotídeo pode ser empregado:

A

em reações de sequenciamento, pois apresenta duas hidroxilas, elevando os níveis de detecção.

B

em reações de sequenciamento por apresentar duas desoxiriboses, elevando os níveis de detecção.

C

para impedir as reações de alongamento de uma cadeia polinucleotídica pela DNA polimerase.

D

para impedir as reações de alongamento de uma cadeia polinucleotídica pela RNA polimerase.

E

para catalisar as reações de alongamento de uma cadeia polinucleotídica pela DNA polimerase e por isso é usado em combinação com Taq DNA polimerases em reações de sequenciamento.

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Q575517

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biologia Molecular de Microorganismos |

Q575517 Técnicas em Laboratório

Para visualização e análise da expressão do gene toxH de uma bactéria, tem-se em mãos um fragmento de DNA com a região codificante de toxH e um outro fragmento do gene gfp para uma proteína fluorescente verde, como apresentado abaixo.

As sequências relativas aos códons de cada gene estão sublinhadas.

Fita + do fragmento com toxH: 5' CCT ATG CCA AAT ... CCT TGA CCC

Fita + do fragmento com gfp: 5' GGG ATG AGT AAA ... GTT TAA TTC

Para criar um gene bacteriano capaz de codificar uma proteína híbrida ToxH verde fluorescente e ter o Gfp na porção NH₂ desta proteína híbrida, a sequência da região codificante deste gene híbrido, deve ser:

A

5'GGG ATG AGT AAA ... GTT TAA TTC CCT ATG CCA AAT...CCT TGA CCC

B

5'GGG ATG AGT AAA ... GTT ATG CCA AAT ... CCT TGA CCC

C

5'GGG ATG AGT AAA ... GTT TAA ATG CCA AAT...CCT TGA CCC

D

5'CCT ATG CCA AAT...CCT TGA ATG AGT AAA ... GTT TAA TTC

E

5'CCT ATG CCA AAT...CCT ATG AGT AAA ... GTT TAA TTC

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Q575379

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biotecnologia em Animais de Laboratório II |

Q575379 Técnicas em Laboratório

Analise as afirmativas a seguir que tratam do método de criopreservação denominado de vitrificação.

I. A vitrificação é um processo ultra-rápido, porém também envolve a passagem por várias temperaturas de congelamento, como no método de congelamento lento, mas sem a ocorrência de cristalização dos meios.

II. A vitrificação está baseada na geração de uma rápida desidratação celular com a utilização de uma solução com concentração de crioprotetor por volta de 40% e o crioprotetor mais utilizado neste método é o etilenoglicol.

III. A permeação dos crioprotetores é considerada essencial na vitrificação, pois podem levar à toxicidade celular dependendo do tempo de exposição e da temperatura.

Assinale:

A

se somente a afirmativa I estiver correta.

B

se somente a afirmativa II estiver correta.

C

se somente a afirmativa III estiver correta.

D

se somente as afirmativas II e III estiverem corretas.

E

se todas as afirmativas estiverem corretas.

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Q575375

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biotecnologia em Animais de Laboratório II |

Q575375 Técnicas em Laboratório

Com relação aos princípios básicos da criopreservação, analise as afirmativas a seguir. I. A criopreservação consiste na manutenção do material biológico a baixas temperaturas, basicamente em nitrogênio líquido a –196 °C. II. A capacidade do material biológico de sobreviver ao processo de criopreservação depende de sua tolerância aos agentes crioproterores, desidratação, resfriamento e reaquecimento. III. Embora os recentes avanços tenham levado a altas taxas de desenvolvimento embrionário pós-criopreservação, o comportamento das células submetidas a essas variáveis ainda é fonte de investigação na área da criobiologia. Assinale:

A

se somente a afirmativa I estiver correta.

B

se somente a afirmativa II estiver correta.

C

se somente a afirmativa III estiver correta.

D

se somente as afirmativas I e II estiverem corretas.

E

se todas as afirmativas estiverem corretas.

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Q575368

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biotecnologia em Animais de Laboratório II |

Q575368 Técnicas em Laboratório

Sobre o método de congelamento lento, assinale a afirmativa incorreta.

A

Na primeira etapa os embriões são expostos a uma solução de equilíbrio sem o crioprotetor por aproximadamente 10 minutos à temperatura ambiente.

B

Os embriões são envasados em palhetas e colocados em um congelador programável onde curvas de refrigeração são estabelecidas. A indução da cristalização ocorre quando a temperatura alcança –7 °C.

C

A cristalização é necessária no congelamento lento porque evita o risco de ultrapassar o ponto de solidificação da solução utilizada, ocorrência que determina um sub-resfriamento do sistema de congelamento.

D

Após a cristalização, o meio externo cristalizado se torna hiposmótico em relação ao embrião e este começa a perder água para o meio. Uma nova redução de temperatura é realizada à velocidade de congelamento de 0,1 a 2 ºC por minuto até a temperatura de –25 e –30 °C. Após, as palhetas são imersas em nitrogênio líquido atingindo a temperatura de –196°C.

E

O tempo de duração do congelamento lento de embriões pode variar de 90 minutos a três horas, dependendo das curvas de resfriamento utilizadas.

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Q575362

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Biotecnologia em Animais de Laboratório II |

Q575362 Técnicas em Laboratório

Sobre crioprotetores, assinale a alternativa incorreta.

A

Para otimizar a sobrevivência das células ao processo de criopreservação, são utilizadas substâncias crioprotetoras. Estas substituem a água do interior das células, baixam o ponto de fusão da solução e protegem as membranas e a integridade relativa da célula.

B

Os crioprotetores não permeáveis ou extracelulares, podem ser de baixo peso molecular como a sacarose, rafinose e galactose, ou de alto peso molecular como a albumina sérica bovina e o ficoll.

C

Com relação aos crioprotetores permeáveis ou intracelulares, são conhecidos o dimetilsulfóxido (DMSO), o glicerol, o propilenoglicol e o etilenoglicol.

D

A permeabilidade da membrana plasmática é uma propriedade de grande importância, porque a entrada na célula dos crioprotetores é fundamental para o sucesso da criopreservação de embriões e gametas.

E

A característica mais importante e que deve ser considerada para os crioprotetores, refere-se à sua toxicidade, pois esta característica limita a concentração em que este pode ser utilizado antes do resfriamento. Com relação à produção de injúrias, como, por exemplo, a lesão das membranas, os crioprotetores não interferem, sendo o método de criopreservação diretamente responsável por este aspecto.

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Q573915

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573915 Técnicas em Laboratório

O ibritumomabe é um anticorpo monoclonal utilizado no tratamento do Linfoma não-Hodgkin. Tal anticorpo se liga a um antígeno da superfície de linfócitos B, o CD-20. Após se ligar à célula transformada, o anticorpo dispara uma resposta citotóxica e apoptótica que acaba por matar tais células. Em relação ao protocolo de preparo desse anticorpo é importante destacar que é essencial a presença de uma molécula conjugada chamada de tiuxetana que na verdade é um quelante com alta afinidade pelo radioisótopo.

A

Indium.

B

Trítio.

C

Carbono.

D

Chumbo.

E

Iodo.

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Q573914

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573914 Técnicas em Laboratório

De forma que os anticorpos possam ser utilizados como ferramentas de detecção de antígenos específicos em métodos de análise em laboratório, se faz necessária a sua conjugação à grupamentos que permitam, através de um sistema acoplado, a sua detecção por métodos normalmente químicos. Em alguns casos, pode-se conjugar o anticorpo monoclonal a uma molécula que possa ser detectada por microscopia de florescência. Esse é o caso do isotiocianato de fluoresceína (FITC). O FITC ligado a imunogloblulina pode ser separado do FITC não ligado por um método cromatográfico. Sobre o tema, assinale a alternativa correta.

A

Em geral, o FITC se ligará durante a reação de conjugação ao aminoácido valina presente na imunoglobulina.

B

Em geral, o FITC se ligará durante a reação de conjugação ao aminoácido lisina presente na imunoglobulina.

C

Em geral, o FITC se ligará durante a reação de conjugação ao aminoácido glutamato presente na imunoglobulina.

D

Em geral, o FITC se ligará durante a reação de conjugação ao aminoácido aspartato presente na imunoglobulina.

E

Em geral, o FITC se ligará durante a reação de conjugação ao aminoácido glicina presente na imunoglobulina.

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Q573913

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573913 Técnicas em Laboratório

O meio HAT (H, hipoxantina. A, aminopterina. T, timidina) amplamente usado na preparação de hibridomas tem como racional de seu funcionamento as alternativas a seguir exceto:

A

para sobreviver no meio HAT, os hibridomas corretamente fusionados devem apresentar a atividade da hipoxantina fosforibosiltranferase.

B

para sobreviver no meio HAT, os hibridomas corretamente fusionados devem apresentar a atividade da timidina quinase.

C

o uso da aminopterina se deve pelo fato desse composto acelerar a síntese de novo de nucleosídeos nas células não fusionadas.

D

a hipoxantina ribosil transferase catalisa a formação de inosina monofosfato a partir de hipoxantina.

E

a hipoxantina ribosil transferase catalisa a formação de guanosina monofosfato a partir de guanina.

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Q573912

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573912 Técnicas em Laboratório

Proteína A e Proteína G são proteínas de bactérias com grande aplicação em pesquisa básica e largamente utilizadas em experimentos de imunoprecipitação. No entanto, cada uma dessas proteínas possui afinidades diferentes por categorias de anticorpos diferentes e obtidos de diferentes espécies animais. Sobre o uso experimental de tais proteínas em imunologia, assinale a alternativa incorreta.

A

O uso de proteína G ao invés de proteína A é recomendado quando se lida com anticorpos de camundongo do tipo IgG₁.

B

A proteína A não se liga à algumas subclasses de IgG, por exemplo a IgG₃ humana.

C

A proteína G possui um número maior de sítios de ligação para a porção Fc dos anticorpos do que a proteína A.

D

A proteína A é produzida pela bacéria Staphylococcus aureus.

E

Uma outra proteína ligadora de IgGs é a proteína L produzida por Peptostreptococcus magnus.

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Q573911

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573911 Técnicas em Laboratório

Anticorpos são ferramentas poderosas em uma série de estudos em biotecnologia. Frequentemente, o pesquisador se depara com o dilema de preparar ou adquirir anticorpos para seus estudos. Nesse caso, o dilema reside na escolha entre anticorpos monoclonais ou anticorpos policlonais. Sobre as características gerais desses anticorpos, assinale a alternativa incorreta.

A

Anticorpos policlonais podem ser gerados muito mais rapidamente, com menos custo operacional e dispondo-se de menores habilidades técnicas do que monoclonais.

B

A principal vantagem dos anticorpos monoclonais está em sua monoespecificidade. Tais anticorpos são capazes de discriminar entre estados conformacionais, níveis de fosforilação ou interações proteína-proteína.

C

A capacidade de reconhecimento de vários epítopos diferentes por um anticorpo policlonal é uma desvantagem para aqueles casos em que os antígenos podem sofrer pequenas variações estruturais ao longo do tempo.

D

Uma vez que um determinado hibridoma for estabelecido, um anticorpo monoclonal específico pode ser continuamente gerado de forma praticamente constante e renovável.

E

Algumas das desvantagens de anticorpos monoclonais podem ser superadas utilizando-se múltiplos anticorpos monoclonais para o mesmo antígeno.

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Q573907

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573907 Técnicas em Laboratório

Sobre a conjugação do composto fluorescente, Texas Red, a um anticorpo, assinale a alternativa incorreta.

A

A conjugação do composto fluorescente ao Texas Red ocorre inicialmente.

B

A imunoglobulina sofre um tratamento com DTT para expor os grupamentos sulfidrila.

C

A imunoglobulina precisa ser separada do DTT livre após a reação de exposição dos grupamentos sulfidrila.

D

É necessário conjugar a proteína fluorescente à imunoglobulina.

E

O reagente n-etilmaleimida é usado após a conjugação da proteína fluorescente à imunoglobulina para clivar os grupamentos metil ainda disponíveis no anticorpo.

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Q573902

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573902 Técnicas em Laboratório

A fusão de proteínas com uma cauda de histidina é comumente empregada na tecnologia recombinante para facilitar a produção, a purificação, e a detecção de uma proteína de interesse. O primeiro passo neste processo é a inserção de uma seqüência que codifica de quatro a dez histidinas consecutivas na região N- ou C-terminal do gene da proteína a ser expressa. A proteína então passa a ter um tag de histidina fusionada a ela e esta proteína de fusão pode ser facilmente purificada usando uma cromatografia de afinidade cuja resina é imobilizada com metal.
Com base nessa informação, assinale alternativa correta.

A

Após a clarificação, o produto só deve ser aplicado numa coluna de afinidade contendo resina imobilizada com níquel, em tampão contendo imidazol.

B

Após a clarificação, o produto pode ser aplicado numa cromatografia em coluna de afinidade contendo resina imobilizada com níquel ou cobalto.

C

A interação da histidina com o metal é tão eficiente que a clarificação é um passo dispensável.

D

A poli-histidina interage com os íons de cobre e enxofre com afinidade de micromolar.

E

Tampões contendo imidazol são usados para estabilizar a coluna.

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Q573898

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573898 Técnicas em Laboratório

O gene da proteína KLM04 foi inserido no plasmídeo de expressão pGEX-2T, que expressa a proteína recombinante em fusão com a GST (Glutationa-S-Transferase) uma enzima de 25,8 kDa. Essas proteínas de fusão são normalmente produzidas em quantidade apreciável por Escherichia coli e são facilmente purificáveis, por cromatografia em coluna de afinidade. Com bases nestas informações, assinale a alternativa correta.

A

O vetor pGEX-2T tem o promotor tac, um promotor forte induzido com IPTG, e que, portanto, produz níveis elevados da proteína de fusão KLM04/GST.

B

A coluna de afinidade contém resina conjugada à trombina.

C

A proteína de KLM04 não pode ser isolada da GST por meio da clivagem por trombina

D

A fusão com KLM04 favorece a interação da GST com glutationa

E

O vetor pGEX-2T tem o promotor bac, um promotor forte induzido com IPTG e que, portanto, produz níveis elevados da proteína de fusão KLM04/GST.

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Q573894

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573894 Técnicas em Laboratório

Alguns métodos de conjugação de proteína com fluoróforo sugerem o uso de Carboxifluoresceina N-Succinimidyl Ester (CFSE) no lugar de Isotiocianato de Fluoresceína (FITC), por fornecerem melhor resultado de marcação. Os Succinimidyl Esteres são reagentes excelentes por sofrerem amino modificações, uma vez que os produtos amídicos formados são muito estáveis. CFSE possui alta reatividade com aminas alifáticas e baixa reatividade com aminas aromáticas. Sobre as estruturas abaixo, assinale a melhor alternativa.
Imagem associada para resolução da questão

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A

Por apresentar alta reatividade com tirosinas, o CFSE é indicado para conjugar proteínas que são usadas em ensaio de incorporação celular.

B

Devido a característica do CFSE, os tampões contendo TRIS, não são os mais aceitáveis por interferirem na marcação.

C

O grupo funcional succinimidil-éster, ligado ao núcleo fluoresceína, produz o CFSE e formam derivados de amina reativos que possuem maior especificidade com muitas outras aminas na presença de outros nucleófilos.

D

a proteína marcada é separada do composto fluorescente com o uso de uma coluna de troca aniônica, seguida de extensiva diálise contra PBS.

E

o CFSE é um composto fluorescente usado eficientemente como marcador celular.

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Q573892

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573892 Técnicas em Laboratório

Considerando que a proteína de interesse é expressa em levedura Pichia pastoris e que o vetor de expressão usado é pPIC9K, o indutor da expressão é:

A

o metanol, adicionado a cada 12 horas, com ampicilina como marcador de seleção.

B

o butanol, adicionado a cada 24 horas, com kananmicina como marcador de seleção.

C

o etanol, adicionado a cada 12 horas, com ampicilina como marcador de seleção.

D

o metanol, adicionado a cada 24 horas, com kanamicina como marcador de seleção

E

o butanol, adicionado a cada 12 horas, com ampicilina como marcador de seleção.

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Q573891

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Insumos Biológicos para a Saúde |

Q573891 Técnicas em Laboratório

Considerando que a proteína é XK14 é secretada para o meio de cultura e que a expressão máxima é obtida após 70 horas, é correto afirmar que os passos de purificação iniciais serão:

A

lise celular, clarificação. purificação em coluna de afinidade, análise em SDS-PAGE.

B

lise celular, ajuste de pH da amostra para pH 6,0, purificação em coluna de troca aniônica, análise em SDS-PAGE.

C

clarificação, ajuste de pH da amostra para pH 6,0, purificação em coluna de troca catiônica, análise em SDS-PAGE.

D

clarificação, ajuste do pH da amostra para pH 8,0, purificação em coluna de troca aniônica, análise em SDS-PAGE.

E

lise celular, ajuste de pH da amostra para pH 6,0, purificação em coluna de troca catiônica, análise em SDS-PAGE.

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