Na área forense, as técnicas de biologia molecular vêm se fortalecendo no transcorrer dos últimos vinte e cinco anos. Isso em função do desenvolvimento de técnicas cada vez mais sofisticadas e em número cada vez maior. Esta evolução somente foi possível pelo desenvolvimento e compreensão da biologia molecular e a descoberta de novas técnicas e métodos eficazes para a detecção do DNA humano, para fins forenses. Julgue as afirmativas a seguir e marque a alternativa CORRETA.

I- Os polimorfismos de comprimento incluem regiões que se repetem no DNA genômico e são chamados de microssatélites (STRs) e minissatélites (VNTRs).

II- Os polimorfismos de sequência constituem-se de diferentes nucleotídeos em uma determinada localização no genoma, sendo que suas variações podem ser manifestadas como regiões de alelos alternativos, substituições, adições ou deleções de bases.

III- Os VNTRs (do inglês, Variable Number of Tandem Repeats) são sequências curtas de bases que ocorrem em números variáveis dentro do grupo de repetições in tandem. O número de repetições encontradas varia de um local para outro dentro do genoma e também varia entre indivíduos. Podendo, assim, ser diferenciados pelo comprimento de sequência VNTR do DNA.

IV- Os STRs (do inglês, Short Tandem Repeats) são nucleotídeos alinhados, em curtas repetidas, organizados em sequência. Estes são trechos de DNA constituídos em unidades repetidas de dois, três ou quatro nucleotídeos e localizados dentro de regiões de sequência única com número menor do que 100 pares de nucleotídeos. Cada região genômica que contém determinado número de repetições de uma sequência constitui um loco genético, que varia entre os indivíduos e também é multialélico.

V- O que difere entre os VNTRs dos STRs é o tamanho, ou seja, o número de bases, sendo que os STRs contêm muitos pares de bases. Esta característica permite que sejam analisadas quantidades maiores de DNA, enquanto que, para a análise dos VNTRs, é necessário menor quantidade e qualidade do DNA, sendo, por isso, mais utilizado para investigação forense, quando só se encontram vestígios de DNA.

Relacione as colunas e marque alternativa CORRETA.

I. RNAm

II. RNAt

III. RNAr

1. Cada um corresponde a uma sequência de bases do RNA mensageiro.

2. É formado a partir de regiões específicas de alguns cromossomos, chamadas regiões organizadoras de nucléolo.

3. É um único filamento de RNA, que se forma tendo um filamento de DNA como molde e é complementar a ele.

4. Também pode ser chamado RNA de transferência ou RNA solúvel.

Durante a realização de um teste para amplificar uma determinada amostra de DNA, você precisaria preparar uma solução tampão de 2,5% a partir de uma outra de 15%. Quanto de solvente você precisaria adicionar a um determinado volume, para obter a solução de 2,5%?

A técnica de western blotting (Towbin et al. 1979; Burnette 1981; Towbin and Gordon 1984) também pode ser denominada protei n immunoblot e consiste na detecção de proteínas específicas em amostras de lisados celulares ou amostras de tecidos. Com base nessa técnica, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.

I- Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências dessas proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados.

II- Diversos métodos espectroscópicos são utilizados para quantificar proteínas em uma solução. O ensaio de Bradford é o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como a rapidez, a não exigência de aquecimento e a alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. O método de Bradford se baseia na mudança de cor do corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida (cor azulada) para cor avermelhada na presença de proteínas. As interações hidrofóbicas e iônicas estabilizam o complexo proteína-corante.

III- Para separar as proteínas de uma amostra homogênea, a técnica mais utilizada é a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-poliacrilamida, que será uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel é preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. As proteínas podem possuir cargas positivas ou negativas, dependendo das cargas dos aminoácidos que as compõem.

IV- Para visualizar uma proteína de interesse, é utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epítopo da proteína, formando um complexo anticorpoantígeno. Esse anticorpo é denominado anticorpo primário, que pode ser policlonal (reconhece mais de um epítopo) ou monoclonal (reconhece apenas um epítopo da proteína de interesse) e é geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho.

A enzima de resistência mais prevalente nos plasmídeos de Klebsiella pneumoniae é a

Aproximadamente metade da população mundial é portadora de H. pylori, sendo que, no Brasil, a prevalência da infecção é de aproximadamente 60%. A infecção está associada com diversas doenças, como úlcera péptica, adenocarcinoma gástrico e linfoma gástrico tipo MALT. Sabe-se que a erradicação da infecção não é simples e os esquemas terapêuticos necessitam de múltiplos agentes farmacológicos. Acerca do microrganismo, diagnóstico e tratamento da infecção gerada pelo H. pylori, assinale a alternativa correta.

É um dos produtos da biotecnologia. São proteínas ultrassensíveis, híbridas, derivadas do sistema imunológico e projetadas para reconhecer anticorpos específicos.As afirmações referem-se a:

No que se refere a xenobióticos, assinale a opção correta.

Considere as seguintes afirmações sobre a reação em cadeia da DNA polimerase (PCR):


I. Segmentos específicos de DNA podem ser facilmente amplificados a milhões de cópias.

II. A PCR pode ser utilizada em medicina forense e diagnósticos clínicos. Produtos da reação de PCR podem ser usados em clonagem.

III. A PCR utiliza uma DNA-polimerase termoestável, porque, para cada etapa de amplificação, o DNA de fita dupla deve ser desnaturado pelo calor.


É CORRETO o que se afirma em: 

Os nucleotídios são os constituintes dos ácidos nucléicos: ácido desoxirribonucléico (DNA) e ácido ribonucléico (RNA), sendo esses os depósitos moleculares de informação genética . Uma célula normalmente possui muitos milhares de genes, onde as moléculas de DNA têm como função o armazenamento e a transmissão da informação biológica. De acordo com a estrutura e função dos ácidos nucléicos, pode-se afirmar que:

A metilação do DNA é uma modificação epigenética crucial do genoma que está envolvida na regulação de diversos processos celulares, incluindo o desenvolvimento embrionário, transcrição, estrutura da cromatina, estabilidade cromossômica etc.. Pesquisadores têm demonstrado interesse em desvendar os enigmas e propor novas tecnologias envolvendo essas modificações epigenéticas. Sobre biotecnologia, é incorreto afirmar que:

As hemoglobinopatias são doenças raras, muitas vezes diagnosticadas de modo tardio. Dessa forma, analise a corrida eletroforética de hemoglobina representada pela figura acima, que reporta os cinco resultados de diferentes pacientes e, em seguida, assinale a alternativa que apresenta os seus respectivos diagnósticos.

Antes dos anos 1980, o RNA era considerado apenas um intermediário de informação passiva de transporte entre o DNA e a síntese proteica. Com a descoberta das propriedades catalíticas do RNA, no início da década de 1980, um prêmio Nobel foi compartilhado entre Tom Cech e Sidney Altma. Atualmente, diversos genes supressores de tumor e oncogenes tiveram seus papéis definidos no desenvolvimento e na progressão do câncer, tornando convidativa a investigação de novos alvos terapêuticos, utilizando essas valiosas informações biotecnológicas. Entre essas descobertas, um mecanismo inovador e evolutivo chamado RNA interferente (RNAi) está revolucionando a oncologia. Ao avaliar a figura acima,que esquematiza os três mecanismos de silenciamento gênico via RNAi, é incorreto afirmar que:

Os ensaios moleculares aplicados ao diagnóstico precoce de doenças infecciosas facilitam o tratamento e permitem a individualização de terapias. Entre essas tecnologias, a reação em cadeia da polimerase, do inglês “Polymerase Chain Reaction” (PCR), detecta infecções, quantifica carga viral, além de avaliar a progressão de doenças. Nesse contexto, o vírus HIV pode ser detectado pela técnica PCR, desde que sua amplificação seja proveniente de moldes de :

Analise as seguintes afirmativas sobre a composição e arquitetura das proteínas, e assinale a alternativa INCORRETA.

Sobre os métodos de separação e caracterização de proteínas, assinale a alternativa INCORRETA. 

                                   

Legenda:

A – cromatograma da amostra suspeita

B – cromatograma de ponto de 50 mg/L de MHS–2.238 da curva de calibração

P.I. – padrão interno

Observação: a área dos picos está expressa ao lado de cada um.

Os cromatogramas contidos na figura representam a eluição de uma droga sintética hipotética, aqui denominada MHS-2.238, e um padrão interno compatível. O cromatograma A é de uma amostra apreendida com traficantes, e o cromatograma B é referente ao padrão cromatográfico da substância MHS-2.238, na concentração de 50 mg/L. Considere que o método seja linear entre 1 e 5.000 mg/L e que este ponto seja representativo do restante da curva. Além disso, considere as condições cromatográficas a seguir: cromatógrafo líquido de alta eficiência (CLAE – HPLC) com detector de UV (ajustado em 254 nm); coluna C18 (fase reversa); e fluxo isocrático de fase móvel composta por metanol:água (65:35). Com base nessas informações e na figura, assinale a alternativa correta.