Questões de Concurso
Para fiocruz
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Assinale a alternativa correta.
I. Remova as bolhas das célula de fluxo. Para isto, o fluxo de solução salina primeiramente é interrompido e a pressão revertida retirando toda a solução salina da célula do fluxo e encaminhada para o descarte. Após o esvaziamento, o sistema preenche automaticamente a célula de fluxo com solução salina em velocidade controlada para evitar a formação de bolhas.
II. Sempre limpe o instrumento antes de desligá-lo ao final da corrida. Para prevenir que o tubo de injeção da amostra fique obstruído ou, para retirar resíduos de corantes, é necessário passar hipoclorito (0,5 a 1%) seguido de água destilada pelo sistema.
III. Realize procedimentos de controle de qualidade do equipamento como a calibração utilizando partículas (beads) marcadas com diferentes fluoróforos para a validação de protocolos envolvendo análises de diferentes fluorescências, além de testes de sensibilidade dos detectores envolvidos na percepção das fluorescências, sensibilidade dos detectores de side scatter (dispersão lateral) e forward scatter (dispersão frontal).
Assinale:
I. O sistema de fluidos é responsável pela condução ordenada de células ou partículas através de um fluxo contínuo, até que elas interceptem os feixes de laser. A ordenação é garantida pelo princípio da focalização isoelétrica, por meio da pressão exercida pelo fluido de condução da amostra até o recipiente de descarte.
II. O sistema ótico é composto por diferentes componentes de excitação (lasers, prismas e lentes) e de coleta (lentes, espelhos, filtros e fotodetectores). Os espelhos dicróicos e os filtros podem ser de três diferentes tipos: curta passagem (short pass), longa passagem (long pass) ou de passagem específica (band pass). Os filtros e espelhos de curta passagem permitem a passagem de luz com comprimento de ondas maiores ou iguais ao comprimento de onda especificado. No entanto, os filtros de longa passagem permitem a passagem de luz com comprimentos de ondas inferiores ou iguais aos especificados.
III. O sistema elétrico é composto de detectores que convertem os sinais luminosos em sinais elétricos gerando pulsos de voltagens. O pulso atinge intensidade máxima quando a partícula ou célula está totalmente inserida no feixe de laser.
Assinale:

I. Os parâmetros gama de uma imagem referem-se às correções matemáticas não lineares que são aplicadas a imagens digitais. Desta forma, o parâmetro gama é principalmente utilizado para aumentar o contraste em áreas escuras na imagem. É sugerido que o gama seja ajustado inicialmente, antes mesmo do ajuste de outros parâmetros como brilho e contraste.
II. Muitos programas de computador capazes de analisar e processar imagens geradas por microscópios eletrônicos são capazes de analisar quantitativamente estruturas ou partículas com a criação de um código binário (binary image) que converte a imagem em tons de branco e preto. Pelo processo da utilização de ferramentas de erosão (erosion), as partículas superpostas podem ser separadas com a remoção dos pixels contidos no perímetro dos objetos e finalmente contados.
III. Em geral, os programas utilizados para análise de imagens geradas por microscópios eletrônicos são capazes de avaliar parâmetros como: contagem de partículas, área das estruturas, diâmetro das estruturas ou partículas, comprimento, centro de uma massa (centroid) e determinação de ângulos.
Assinale:
I. Receptor celular CD3 revelado com anticorpo marcado com PE.
II. Receptor celular CD8 revelado com anticorpo marcado com FITC.
III. Receptor celular CD45 revelado com anticorpo marcado com PerCP.
IV. Receptor celular CD4 revelado com APC.
Além destes marcadores, você deseja avaliar a expressão do receptor CD25 nestas células. A melhor opção de marcador a ser utilizado é o com emissão de:
I. No processo de ultramicrotomia, o espécime é cortado em fatias finas para serem observadas em microscópios eletrônicos. Neste processo, as fatias são geradas com uma espessura mínima de 300 nm, de forma que os elétrons gerados pelo microscópio eletrônico de varredura sejam capazes de atravessar a amostra para a geração das imagens.
II. No processo de crioultramicrotomia, as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e fatiadas utilizando lâminas também resfriadas. O processo de congelamento deve ser rápido de forma que a água contida dentro das células seja vitrificada em um sólido amorfo prevenindo a formação de cristais que podem danificar as células. No entanto, ao contrário da ultramicrotomia, as amostras não devem ser previamente fixadas com aldeídos, além de não ser indicado para a localização de estruturas ou antígenos por protocolos de imunocitoquímica ou análises por raios X.
III. Ultramicrótomos possuem uma série de lâminas de vidro ou diamante que, por meio de um braço mecânico, fatiam as amostras imobilizadas em blocos de resina ou de parafina. Vibrações devem ser evitadas utilizando mesas anti-vibrações e todo o processo deve ser feito com lâminas embebidas em fluido, sendo a água destilada o fluido mais utilizado.
Assinale:
I. O glutaraldeído é utilizado como fixador primário devido a sua habilidade de estabelecer ligações entre proteínas através dos seus grupos aldeídos, o que torna esta molécula bi-funcional. Especificamente, os grupamentos aldeídos do glutaraldeído reagem com lisinas em proteínas adjacentes, além de interagirem com lipídeos, carboidratos e ácidos nucléicos.
II. O tetróxido de ósmio é um fixador secundário e se liga especificamente à proteínas promovendo a sua agregação. Protocolos de visualização dos microtúbulos celulares incluem a fixação por tetróxido de ósmio a 4°C. Além disto, este metal pesado acrescenta densidade e contraste ao tecido biológico.
III. Um protocolo geral para preparação de amostras envolve a fixação primária com glutaraldeido; lavagem em tampão; fixação secundária com tetróxido de ósmio; desidratação com séries de alcoóis (30%, 50%, 70%, 95% e absoluto); transição para solvente óxido de propileno; infiltração da resina com um aumento progressivo das concentrações de óxido de propileno e diminuição das concentrações da resina e finalmente secagem.
Assinale:
