A questão aborda a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), uma ferramenta fundamental em diagnóstico molecular, especialmente em Biomedicina. Vamos analisar cada afirmativa para entender a lógica por trás da questão.

Afirmativa I: "Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR."

Esta afirmativa está incorreta. Embora a PCR tradicional use uma DNA polimerase, é possível detectar vírus de RNA, como o HIV ou SARS-CoV-2, utilizando uma etapa adicional de transcrição reversa. Esta etapa converte o RNA em DNA complementar (cDNA), que pode então ser amplificado pela PCR. Esta técnica é conhecida como RT-PCR (Reverse Transcription PCR), destacada em diretrizes como as da OMS para detecção de patógenos virais.

Afirmativa II: "É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar."

Esta afirmativa está correta. A técnica de PCR multiplex permite a detecção simultânea de diferentes patógenos em uma única reação, utilizando múltiplos pares de primers, cada um específico para o alvo desejado. Isso é amplamente utilizado em diagnósticos clínicos para aumentar a eficiência e reduzir custos.

Afirmativa III: "A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo."

Esta afirmativa está incorreta. Além de ser usada para detecção qualitativa, a PCR pode ser quantitativa, como na PCR em tempo real (qPCR), que permite a quantificação do ácido nucleico em amostras, essencial para monitorar carga viral em pacientes, como em infecções por HIV.

Com base na análise, a alternativa que contém a afirmativa correta é a Alternativa B, pois somente a afirmativa II está correta.

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I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR. Virus de RNA também podem ser detectados. 

II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar. Correta. 

III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo. A PCR em Tempo Real tem carater qualitativo e quantitativo. 

I- a técnica RT PCR detecta amostras de RNA, baseando-se no princípio da transcriptase reversa

Ill - PCR tempo real realiza análise quantitativa