O subcultivo da maioria das células aderentes envolve a
utilização da protease tripsina e do sal EDTA. Sobre o motivo
da utilização destes reagentes no procedimento de
subcultivo celular, analise as afirmativas a seguir.
I. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras pelas proteínas que compõe a
matriz extracelular. Enquanto a tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas, a função do EDTA é
quelar os íons Ca2+, que são requeridos para a ligação
célula-célula mediada pelas caderinas. Desta forma, tanto
o EDTA quanto a tripsina servirão para promover o
destacamento das células do frasco de cultivo e sua
separação.
II. As células são cultivadas geralmente na presença de soro
que fornece fatores de crescimento necessários para a
divisão celular. A fim de realizar o subcultivo é necessário
eliminar o soro presente no meio. A tripsina irá clivar as
proteínas do soro e o EDTA facilitará a formação de
agregados protéicos que serão facilmente removidos ao
se descartar este meio, promovendo assim a retirada do
soro do meio de cultivo.
III. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras através das proteínas que
compõe a matriz extracelular. A tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas e a função do EDTA é
servir de co-fator para a tripsina aumentando sua
atividade. Desta forma, promovendo o destacamento das
células do frasco de cultivo e sua separação.
Assinale:

Question

O subcultivo da maioria das células aderentes envolve a
utilização da protease tripsina e do sal EDTA. Sobre o motivo
da utilização destes reagentes no procedimento de
subcultivo celular, analise as afirmativas a seguir.
I. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras pelas proteínas que compõe a
matriz extracelular. Enquanto a tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas, a função do EDTA é
quelar os íons Ca2+, que são requeridos para a ligação
célula-célula mediada pelas caderinas. Desta forma, tanto
o EDTA quanto a tripsina servirão para promover o
destacamento das células do frasco de cultivo e sua
separação.
II. As células são cultivadas geralmente na presença de soro
que fornece fatores de crescimento necessários para a
divisão celular. A fim de realizar o subcultivo é necessário
eliminar o soro presente no meio. A tripsina irá clivar as
proteínas do soro e o EDTA facilitará a formação de
agregados protéicos que serão facilmente removidos ao
se descartar este meio, promovendo assim a retirada do
soro do meio de cultivo.
III. As células aderem à superfície inferior da garrafa de
cultivo e umas as outras através das proteínas que
compõe a matriz extracelular. A tripsina reconhece e cliva
regiões nativas destas proteínas e a função do EDTA é
servir de co-fator para a tripsina aumentando sua
atividade. Desta forma, promovendo o destacamento das
células do frasco de cultivo e sua separação.
Assinale: Alternativa A: se somente a afirmativa I estiver correta. Ou Alternativa B: se somente a afirmativa II estiver correta. Ou Alternativa C: se somente a afirmativa III estiver correta. Ou Alternativa D: se somente as afirmativas I e II estiverem corretas. Ou Alternativa E: se todas as afirmativas estiverem corretas.

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [A] se somente a afirmativa I estiver correta. Tema Central: A questão aborda o procedimento de subcultivo celular, especificamente o uso de tripsina e EDTA para destacar e separar células aderentes em cultura. Entender o papel de cada reagente é crucial para manipular culturas celulares de forma eficaz.

Justificativa para a Alternativa Correta (A): A afirmativa I está correta. No contexto de culturas celulares, as células aderem ao substrato e entre si através de proteínas da matriz extracelular. A tripsina é uma protease que cliva essas proteínas, facilitando a liberação das células. O EDTA atua quelando íons Ca2+, necessários para a função das caderinas, que são proteínas de adesão célula-célula. Portanto, ambos os reagentes são essenciais para separar as células do substrato e umas das outras.

Análise das Alternativas Incorretas:

Alternativa II: Esta afirmativa é incorreta porque o principal objetivo do uso de tripsina e EDTA não é remover o soro do meio de cultivo. Embora a tripsina possa clivar proteínas do soro, sua função primária no subcultivo é clivar as proteínas da matriz extracelular. O EDTA, por sua vez, não facilita a formação de agregados proteicos; sua função é quelar íons de cálcio.

Alternativa III: Esta afirmativa está errada ao afirmar que o EDTA serve como co-fator para aumentar a atividade da tripsina. Na realidade, o EDTA atua quelando íons cálcio, que são importantes para a adesão celular, mas não influencia diretamente a atividade da tripsina. O EDTA e a tripsina têm funções distintas e complementares no processo de subcultivo.

Estratégias para Interpretação: Ao analisar questões relacionadas a técnicas laboratoriais em biologia molecular, é essencial entender os papéis específicos de reagentes comuns. Pergunte-se sempre qual é a base científica que justifica o uso de cada componente no protocolo experimental. Isso ajuda a eliminar alternativas baseadas em conceitos incorretos ou mal interpretados.

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