O tema central desta questão envolve a contagem de células em cultura, um procedimento essencial para garantir a consistência e reprodutibilidade nos experimentos em biologia molecular e análises clínicas. A técnica mencionada é a utilização da câmara de Neubauer, que é um método padrão para contar células em suspensão.

Alternativa Correta: D

A alternativa D afirma que, ao se misturar volumes iguais de uma suspensão celular e de uma solução de azul de tripan a 1%, e após a exclusão das células não viáveis, obteve-se um total de 150 células, resultando em uma concentração de 3,75 × 10⁵ células/mL na suspensão original. Vamos analisar por que esta alternativa é a exceção:

Para calcular a concentração de células, a fórmula utilizada é:

Células/mL = (número total de células contadas / número de quadrados contados) × fator de diluição × 10⁴

Considerando que foram contadas 150 células em quatro quadrados, e assumindo que a mistura foi feita em volumes iguais (diluição de 1:2), o cálculo ficaria:

Concentração = (150 / 4) × 2 × 10⁴ = 7,5 × 10⁵ células/mL

A concentração correta deveria ser 7,5 × 10⁵ e não 3,75 × 10⁵, como indicado na alternativa D. Portanto, essa alternativa é a exceção, pois apresenta um valor de concentração incorreto devido a um erro no cálculo da diluição.

Análise das Alternativas Incorretas:

A: Esta alternativa descreve corretamente o uso da câmara de Neubauer, incluindo a estrutura do grid e o volume de cada quadrado. Este conhecimento é crucial para realizar contagens precisas de células.

B: Explica adequadamente o uso do azul de tripan para diferenciar células viáveis de não viáveis. Células viáveis excluem o corante, enquanto as não viáveis o absorvem, tornando-se azuis. É um método padrão para avaliar a viabilidade celular.

C: A alternativa corretamente diferencia o preparo de células aderentes e suspensas. As células aderentes necessitam de tripsinização para serem contadas, enquanto as células em suspensão apenas precisam ser homogeneizadas.

E: A alternativa descreve corretamente os métodos de contagem, usando tanto o quadrado central quanto os quatro quadrados dos cantos, e a necessidade de calcular a média das contagens para obter precisão.

Essas explicações devem ajudar a entender a importância de procedimentos corretos na contagem de células e a aplicar esse conhecimento em situações práticas de laboratório.

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A alternativa D é a única que não se relaciona corretamente ao procedimento de contagem e cálculo de número de células em uma suspensão. Ela afirma que, após a contagem de 150 células viáveis após a mistura com a solução de azul de tripan a 1%, a concentração das células na suspensão original é 3,75 × 105 células/mL. No entanto, essa conclusão é errada pois não é fornecida nenhuma fórmula ou método para calcular a concentração de células a partir do número de células contadas. Além disso, o valor 3,75 × 105 células/mL parece ser arbitrário e não tem qualquer relação evidente com o número de células contadas (150 células). Portanto, a afirmação não é correta no contexto do procedimento de contagem de células. As demais alternativas A, B, C e E descrevem corretamente diferentes aspectos do procedimento de contagem de células.