O tema central desta questão é sobre as boas práticas laboratoriais aplicadas ao diagnóstico molecular por PCR. Vamos analisar cada afirmativa para entender o que está correto e o que precisa ser ajustado conforme as diretrizes atuais.

Afirmativa I: "A única área que deve ser separada fisicamente das demais, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, é a área onde é realizada a extração de ácidos nucléicos a partir das amostras clínicas."

Esta afirmativa está incorreta. Em um laboratório de diagnóstico molecular, não é apenas a área de extração de ácidos nucléicos que deve ser separada. Devemos ter áreas distintas para diferentes etapas do processo de PCR, como a preparação da mistura de PCR, a amplificação e a análise pós-PCR. Isso evita contaminação cruzada, especialmente com amplicons, que são produtos de PCR altamente concentrados e propensos a causar contaminação.

Afirmativa II: "O fluxo de trabalho, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, deve ser sempre a partir da área livre de DNA para a área onde os tubos das reações finais de PCR são abertos ou manipulados (área que contém amplicons)."

Esta afirmativa está correta. O fluxo de trabalho deve sempre ser unidirecional, começando em áreas livres de DNA exógeno para minimizar o risco de contaminação. Isso significa que as áreas iniciais de preparação e manipulação de reagentes devem ser separadas daquelas onde os produtos de PCR (amplicons) são manuseados.

Afirmativa III: "Para a pipetagem das misturas de PCR, diluição de oligonucleotídeos, etc, não é necessária a utilização de ponteiras com barreira."

Esta afirmativa está incorreta. O uso de ponteiras com barreira é fundamental nas práticas de PCR para evitar a contaminação cruzada entre amostras e reagentes. As ponteiras com barreira previnem que aerossóis e resíduos de líquidos contaminem o pipetador, proporcionando maior segurança nas análises.

Portanto, a alternativa correta é a B, pois somente a afirmativa II está correta.

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I. A única área que deve ser separada fisicamente das demais, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, é a área onde é realizada a extração de ácidos nucléicos a partir das amostras clínicas. ERRADA

• É necessário dispor de uma área separada para a extração/preparação das reações de amplificação e para a amplificação/detecção dos produtos de amplificação (áreas de pré e pós PCR).

II. O fluxo de trabalho, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, deve ser sempre a partir da área livre de DNA para a área onde os tubos das reações finais de PCR são abertos ou manipulados (área que contem amplicons). CORRETA

III. Para a pipetagem das misturas de PCR, diluição de oligonucleotídeos, etc, não é necessária a utilização de ponteiras com barreira. ERRADA

• As pipetas utilizadas para manipular as amostras:

1. Devem ser destinadas exclusivamente a este uso
2. Devem ser do tipo deslocamento positivo ou usar ponteiras com barreira / filtro
3. Devem ser estéreis, sem a presença de DNAse e RNAse, sem a presença de DNA e RNA.