O gênero Leptospira é composto por bastonetes helicoidais, aeróbios obrigatórios e móveis. Classicamente, foi dividido em duas espécies: L. interrogans, com os patógenos humanos, e L. biflexa, com cepas saprófitas isoladas do ambiente. Leptospira é dividida em sorovares. A classificação fenotípica tem sido substituída gradualmente pela genotípica com, até o momento, 17 genoespécies compreendendo todos os sorovares do gênero.

Sobre o diagnóstico laboratorial da leptospirose, analise as afirmativas a seguir.

I. Em muitos centros clínicos, o principal método diagnóstico é a análise sorológica, com a técnica de microaglutinação em destaque como a metodologia de referência. Nessa técnica, o soro do paciente reage com suspensões antigênicas de diferentes sorovares de leptospiras e, após a incubação, a mistura antígeno-soro é avaliada microscopicamente e o título de anticorpos determinado.

II. Diferentes meios de cultura podem ser utilizados para o isolamento de Leptospira, como por exemplo, os meios de Fletcher, Tween 80-albumina sérica bovina e Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris. Em tais meios, a temperatura ótima de crescimento é de 35 a 37ºC.

III. O diagnóstico sorológico de leptospirose pode ser confirmado por meio de sorologia pareada. Nesse caso, uma diferença ≥ 4 nos títulos de anticorpos entre duas análises confirma o diagnóstico, independente do intervalo entre as amostras. Nos testes em apenas uma amostra, o CDC sugere títulos > 1:200 em paciente com doença clínica como evidência presuntiva de leptospirose. Além disso, a ocorrência de títulos extremamente elevados pode ser utilizada como marcador de infecção recente.

Algumas técnicas bioquímicas diretas podem ser usadas em identificações preliminares diretamente a partir de colônias de bactérias selecionadas em meios de cultura.

Sobre os testes de ensaios direto que podem ser realizados em colônias isoladas em placas de cultura, analise as afirmativas a seguir.

I. No teste da catalase, algumas gotas de peróxido de hidrogênio a 3% são colocadas diretamente sobre a colônia e a rápida efervescência indica produção de oxigênio molecular e um teste positivo. Esse teste é freqüentemente utilizado para diferenciar estafilococos (positivo) de estreptococos (negativo) ou Clostridium tertium (positivo) de Bacillus spp. (negativo).

II. No teste da citocromo oxidase, o diidrocloreto de ρ-fenilenodiamino, que substitui o oxigênio como aceptor artificial de elétrons, é usado. Na técnica direta, duas a três gotas do reagente são adicionadas nas colônias e a cor azul é indicativa da atividade de citocromo oxidase e de um teste positivo. O teste é útil para a classificação preliminar de Pseudomonas spp., Aeromonas spp. e Pasteurella spp. todas oxidase positivas.

III. O teste de indol se baseia na formação de um complexo vermelho. O complexo se forma quando o indol, um dos produtos da degradação metabólica do triptofano, reage com o grupo aldeído do ρ-dimetilaminobenzaldeído. Nos testes rápidos, tiras reativas impregnadas com o reagente ρ-dimetilaminobenzaldeído, representado pelos reativos de Kovacs ou Ehrlich, são usadas. Para esse teste, podemos utilizar cepas de Escherichia coli como controle negativo e cepas de Klebsiella pneumoniae como controle positivo.