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I. As sondas são marcadas com uma molécula que emite fluorescência (quencher) numa extremidade e com uma molécula que absorve a fluorescência (reporter) na outra extremidade.
II. Em um protocolo para alvos múltiplos (multiplex) numa mesma reação, as sondas específi cas para cada sequência genômica poderão ser marcadas com a mesma molécula repórter, necessitando somente de moléculas quencher distintas.
III. Durante o desenho dos oligonucleotídeos, a região de hibridização da sonda deve estar localizada à montante da região de hibridização do primer sense (forward).
As afirmativas I, II e III são, respectivamente:
I. A porcentagem recomendada do conteúdo GC é de 40% a 60%.
II. A terminação 3’ deve ser rica em AT.
III. Repetições de bases invertidas ou sequências auto complementares são recomendadas.
As afirmativas I, II e III são, respectivamente:
I. Todas as linhagens celulares necessitam de incubação em atmosfera com 5% de CO2.
II. A temperatura de 37°C é apropriada para a VERO.
III. No preparo de meio de crescimento é recomendado acrescentar soro fetal bovino para uma concentração final de 2%.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que: