Tema central: escolher a DNA polimerase adequada para RT-PCR em tempo real (qPCR) e RT-LAMP. Cada técnica exige propriedades enzimáticas distintas: o qPCR depende da atividade exonuclease 5’→3’ (para sondas TaqMan) e resistência a ciclos de alta temperatura; o LAMP requer atividade de deslocamento de fita robusta para amplificar em isotermia (60–65°C).

Alternativa correta: D – A Bst DNA polimerase é a escolha para RT-LAMP porque possui atividade de polimerase 5’→3’ e deslocamento de fita muito eficiente, permitindo amplificação sem desnaturação térmica cíclica. Em RT-LAMP, agrega-se uma transcriptase reversa (ou usa-se versões “WarmStart” que a incorporam). Evidência: LAMP foi descrita por Notomi et al., mostrando o papel central do deslocamento de fita; fornecedores como NEB recomendam Bst para LAMP.

Por que as demais estão incorretas?

A – “Taq em ambos por ter exonuclease 5’→3’”. A Taq até é adequada ao qPCR por essa exonuclease 5’→3’ (hidrolisa sondas TaqMan), mas não tem deslocamento de fita robusto, requisito-chave do LAMP. Logo, não serve para LAMP de forma canônica.

B – “Bst para RT-qPCR por polimerase 5’→3’ e deslocamento de fita”. A Bst não suporta os ciclos de 95°C do PCR e não possui exonuclease 5’→3’, sendo inadequada para qPCR com sondas TaqMan. Seu uso típico é isotérmico (LAMP), não termociclado.

C – “Taq no RT-qPCR por ter exonuclease 3’→5’”. Falso: a Taq não tem exonuclease 3’→5’ (prova de leitura). Ela funciona no qPCR por sua exonuclease 5’→3’ (TaqMan) e por ser termostável, mas sem proofreading.

E – “Taq no RT-LAMP por ter deslocamento de fita”. A Taq não possui deslocamento de fita suficiente para a arquitetura do LAMP (múltiplos primers e amplificação contínua), por isso não é a escolha.

Estratégia de prova: associe palavras-chave — “exonuclease 5’→3’” remete a Taq/qPCR (TaqMan); “deslocamento de fita” remete a Bst/LAMP. Cuidado com a pegadinha “exonuclease 3’→5’” (prova de leitura), que a Taq não possui.

Referências essenciais: Notomi T. et al., Nucleic Acids Res. 2000 (LAMP); Guias NEB sobre Bst/LAMP; Applied Biosystems Real-Time PCR Handbook; CDC 2019-nCoV Real-Time RT-PCR Panel. Revisões em UpToDate e manuais técnicos corroboram essas propriedades enzimáticas.

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