A maioria das células e tecidos humanos é incolor. Para que ...
A maioria das células e tecidos humanos é incolor. Para que possam ser visualizados ao microscópio, é essencial que as lâminas passem pelo processo de coloração. Considerando a coloração de rotina (hematoxilina-eosina), analise as assertivas abaixo:
I- Antes da coloração, é necessário remover a parafina presente nos cortes, pois a hematoxilina-eosina é aquosa e não penetra na parafina.
II- Antes da coloração, as lâminas de vidro com os cortes nelas aderidos são mergulhadas em álcool absoluto para remoção da parafina.
III- A eosina é a parte ácida do corante, com afinidade pelas estruturas básicas. A coloração final obtida varia do rosa claro ao vermelho.
IV- A hematoxilina é parte básica do corante e cora em azul ou violeta o núcleo das células e regiões citoplasmáticas ricas em ácido ribonucleico (RNA).
V- Após a coloração, os cortes são montados para preservação e observação. Para tal, aplica-se uma gota de xilol sobre o corte ou sobre uma lamínula.
É CORRETO o que se afirma apenas em:
Gabarito comentado
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Tema central: fluxo técnico da coloração de rotina Hematoxilina-Eosina (H&E): desparafinação, reidratação, coloração (hematoxilina → eosina), desidratação, diafanização e montagem.
Alternativa correta: E (I, III e IV)
I. Verdadeiro. Antes da coloração, remove-se a parafina porque os corantes H&E são aquosos e não penetram em meio hidrofóbico. A desparafinação é feita com xilol (ou tolueno), seguida de álcool em gradiente até água para reidratar o tecido. Isso garante acesso do corante aos alvos celulares. (Bancroft & Gamble; Kiernan)
III. Verdadeiro. A eosina é um corante ácido que se liga a estruturas básicas/catiônicas (p. ex., proteínas citoplasmáticas, colágeno, hemácias), produzindo tonalidades do rosa ao vermelho — estruturas eosinofílicas. (Junqueira & Carneiro)
IV. Verdadeiro. A hematoxilina (na forma de hemalume com mordente) funciona como corante básico, corando de azul/violeta os núcleos e regiões ricas em RNA (estruturas basofílicas). Passos de differentiation e bluing refinam o contraste. (Kiernan; Bancroft & Gamble)
Por que as demais assertivas estão incorretas?
II. Falsa. Álcool absoluto não remove parafina de forma adequada; a parafina é removida por xilol. O álcool é usado após o xilol para reidratar (gradientes de etanol até água), não para desparafinar. Confundir esses passos é pegadinha clássica.
V. Falsa. Após coloração e clarificação em xilol, monta-se a lâmina com um meio de montagem resinoso (ex.: Permount, DPX) e lamínula. Xilol é apenas agente diafanizador, não é meio de montagem.
Análise das alternativas:
A (I, II e V): errada porque II e V são falsas (álcool não desparafina; xilol não serve para montar).
B (I, II, IV e V): errada pelos mesmos motivos: inclui II e V, ambas incorretas.
C (I, II, III e IV): errada porque inclui II (falsa).
D (III, IV e V): errada porque inclui V (falsa).
Dicas de prova: - Lembre-se: Parafina = hidrofóbica → remover com xilol, depois reidratar com álcool → água. - Eosina (ácida) cora estruturas básicas em rosa/vermelho; hematoxilina (básica) cora núcleos/RNA em azul/violeta. - Montagem sempre com meio resinoso compatível com xilol.
Referências essenciais: Bancroft & Gamble, Theory and Practice of Histological Techniques; Kiernan JA, Histological and Histochemical Methods; Junqueira & Carneiro, Histologia Básica.
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