Entre os diferentes métodos aplicados para detecção de
proteínas podem ser citados os ensaios de fluxo lateral (LFA),
western blot, espectrometria de massa, dentre outros. Sobre
este tópico, considere que:
I. os ensaios de fluxo lateral (LFA) fornecem resultados
qualitativos ou medições semiquantitativas de proteínas,
entretanto essa técnica apresenta limitações quando há
elevada concentração da proteína alvo na amostra, de
forma que saturam os canais de ligação do anticorpo.
II. a técnica de Western blot é empregada na separação de
proteína de uma amostra que utiliza dados de tamanho
associados ao uso da técnica de eletroforese em gel. A
membrana de nitrocelulose é utilizada para fixar bandas de
proteínas, separá-las e por fim reagir com o anticorpo
específico marcado que visa detectar a proteína alvo.
III. a espectrometria de massa é uma ferramenta de análise
proteômica que permite analisar misturas complexas de
substância, fornecendo um perfil completo da com- posição
proteica.
IV. os ensaios de fluxo lateral (LFA) são comumente usados
para fins clínicos, diagnóstico e detecção de proteínas.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que:

Question

Entre os diferentes métodos aplicados para detecção de
proteínas podem ser citados os ensaios de fluxo lateral (LFA),
western blot, espectrometria de massa, dentre outros. Sobre
este tópico, considere que:
I. os ensaios de fluxo lateral (LFA) fornecem resultados
qualitativos ou medições semiquantitativas de proteínas,
entretanto essa técnica apresenta limitações quando há
elevada concentração da proteína alvo na amostra, de
forma que saturam os canais de ligação do anticorpo.
II. a técnica de Western blot é empregada na separação de
proteína de uma amostra que utiliza dados de tamanho
associados ao uso da técnica de eletroforese em gel. A
membrana de nitrocelulose é utilizada para fixar bandas de
proteínas, separá-las e por fim reagir com o anticorpo
específico marcado que visa detectar a proteína alvo.
III. a espectrometria de massa é uma ferramenta de análise
proteômica que permite analisar misturas complexas de
substância, fornecendo um perfil completo da com- posição
proteica.
IV. os ensaios de fluxo lateral (LFA) são comumente usados
para fins clínicos, diagnóstico e detecção de proteínas.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que: Alternativa A: apenas I e II estão corretas. Ou Alternativa B: apenas I, II, IV estão corretas. Ou Alternativa C: todas estão corretas. Ou Alternativa D: apenas III, IV estão corretas. Ou Alternativa E: apenas II, III estão corretas.

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [C] todas estão corretas. Tema central: Métodos laboratoriais para detecção de proteínas em amostras biológicas, com foco em LFA (ensaio de fluxo lateral), Western blot e espectrometria de massa, seus usos, limitações e princípios.

Gabarito: C — todas as afirmativas estão corretas.

Justificativa da correta (C):

I – LFA: fornece resultado qualitativo ou semiquantitativo (ex.: testes rápidos). Tem limitação em altas concentrações do analito pelo efeito “gancho” (prozona), quando excesso de antígeno satura sítios de anticorpos, podendo reduzir sinal. Estratégia prática: diluir a amostra suspeita de alta carga antigênica. (OMS/WHO – guias de RDTs; UpToDate)
  II – Western blot: separa proteínas por Eletroforese em gel (SDS-PAGE), baseada no tamanho; depois as bandas são transferidas para membrana de nitrocelulose (ou PVDF), onde permanecem imobilizadas e reagem com anticorpos específicos marcados para detecção. A membrana não separa; ela mantém as bandas já separadas e permite a detecção — interpretação correta do enunciado. (Harlow & Lane, Antibodies; UpToDate)
  III – Espectrometria de massa: ferramenta central da proteômica, capaz de analisar misturas complexas e gerar perfil abrangente da composição proteica, incluindo identificação e quantificação relativa/absoluta (DDA/DIA, LC-MS/MS). (Tietz Clinical Chemistry; revisões de proteômica)
  IV – LFA em clínica: uso amplo em diagnóstico e detecção de proteínas (hCG no teste de gravidez, troponina, antígenos de infecções como influenza, SARS-CoV-2). (OMS; UpToDate)

Por que as demais alternativas estão erradas?

A (I e II): exclui III e IV, mas espectrometria de massa e uso clínico do LFA são corretos.
  B (I, II, IV): exclui III; incorreto porque MS é ferramenta validada para perfil proteico.
  D (III, IV): exclui I e II; incorreto pois o efeito gancho no LFA e o fluxo do Western blot estão corretos.
  E (II, III): exclui I e IV; incorreto pois o LFA é semiquantitativo com limitação por alta concentração e é rotineiro em diagnósticos.

Dicas de prova:

Leia termos-chave: “qualitativo/semiquantitativo” (LFA) e “tamanho via eletroforese” (Western blot).
  Identifique a pegadinha: no Western blot, a separação ocorre no gel; a membrana só imobiliza e permite a detecção.
  Lembre do efeito gancho em testes rápidos; pense em diluição quando o resultado não condiz com a clínica.

Referências úteis: UpToDate (Laboratory methods in immunodiagnosis); WHO guidelines on rapid diagnostic tests; Harlow & Lane – Antibodies: A Laboratory Manual; Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics.

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