Os princípios metodológicos da citometria de fluxo consider...
Os FACs permitem a purificação de células marcadas com fluorescência dentre uma concentração de células mistas. Sobre o seu funcionamento considere que:
I. no componente fluídico de um citômetro permite a coleta e transporte amostral, enquanto que o componente óptico proporciona a excitação da partícula/célula, que é conectada a uma rede eletrônica de detectoresligada a um computador.
II. a rede eletrônica detecta o sinal emitido e converte em dados digitais não proporcionais à intensidade da luz que estão conectadas ao software computacional que executa a análise de dados.
III. o processo é baseado na radiação laser direcionada, que excita substâncias fluorescentes presentes nas células, que podem ser compreendidas por interpolação das informações biológicas, moleculares e/ou químicas das células em suspensão.
IV. a citometria de fluxo pode ser empregada em diversas aplicações, seja na detecção de células inteiras, e componentes celulares tais como organelas, núcleos ou moléculas de DNA, RNA.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que:
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Tema central: Citometria de fluxo e, em especial, o funcionamento dos Fluorescence-Activated Cell Sorters (FACs), que analisam e separam células com base em luz dispersa e fluorescência. O equipamento tem três blocos: fluídico (foca e transporta a amostra), óptico (laser excita fluorocromos; detectores captam dispersão e fluorescência) e eletrônico/computacional (converte sinais em dados e faz o “gateamento”/análise).
Alternativa correta: E (I, III e IV)
I – Correta. O componente fluídico realiza a focalização hidrodinâmica e conduz as células; o componente óptico (lasers, filtros, fotomultiplicadores) excita e detecta os sinais; tudo é integrado a uma eletrônica de detecção conectada ao computador para aquisição e análise. Isso descreve fielmente a arquitetura dos citômetros e dos FACs.
III – Correta. A base é o laser que excita fluoróforos; os sinais coletados (dispersão frontal/lateral e fluorescências múltiplas) permitem inferir propriedades biológicas, moleculares e químicas (ex.: imunofenótipo, ciclo celular, viabilidade) de células em suspensão.
IV – Correta. A citometria analisa células inteiras e também componentes ou conteúdos celulares (p. ex., núcleos, organelas, DNA/RNA por colorações específicas como PI, DAPI, SYTOX; análise de ploidia/ciclo celular).
Por que II está incorreta? A assertiva afirma que os dados digitais são não proporcionais à intensidade luminosa. Na prática, os detectores (geralmente PMTs) e a eletrônica convertem a luz em sinais elétricos que, após ganho e conversão A/D, geram valores proporcionais à intensidade (em escala linear ou logarítmica). Portanto, o núcleo do erro é o “não proporcionais”. O vínculo ao software e à análise é correto, mas a proporcionalidade é fundamental para quantificação.
Análise das alternativas:
- A (I, II, III): inclui II, que é falsa.
- B (II, III): inclui II e exclui I e IV, portanto incorreta.
- C (I, II, IV): inclui II, que é falsa.
- D (II, III, IV): inclui II, que é falsa.
- E (I, III, IV): única combinação compatível com os princípios do FACs.
Dica de prova: Em citometria, lembre o “tripé” fluídico–óptico–eletrônico e desconfie de expressões absolutas/negativas como “não proporcional”. FACs fazem análise e separação por gotículas carregadas e deflexão eletrostática.
Referências essenciais: Shapiro HM. Practical Flow Cytometry; Maecker HT et al. Current Protocols in Cytometry; UpToDate: Principles of flow cytometry and cell sorting.
Gabarito: E
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