Tema central: A questão aborda métodos analíticos para identificação e determinação do teor de flavonoides em drogas vegetais, além de discutir a mensuração da atividade antioxidante desses compostos, tema importante na farmacognosia clínica e controle de qualidade de produtos farmacêuticos de origem vegetal.

Alternativa correta: B

O método de DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazila) proposto por Brand-Williams é amplamente utilizado para determinar a atividade antioxidante de extratos de drogas vegetais ricas em flavonoides, permitindo avaliar o potencial desses compostos em neutralizar radicais livres. A técnica é internacionalmente reconhecida em literatura científica e em protocolos de controle de qualidade de fitoterápicos. O método consiste na redução do radical DPPH (coloração púrpura) quando recebe elétrons dos antioxidantes, resultando em perda de cor; essa mudança é quantificada espectrofotometricamente.
Segundo Brand-Williams et al. (1995): “The DPPH radical assay provides a simple, rapid and sensitive method for the antioxidant screening of samples, particularly plant extracts and food compounds.”

Análise das alternativas incorretas:

A) Incorreta. O método de Folin-Denis é utilizado para dosagem de taninos e não é específico para flavonoides. Pode haver confusão, pois ambos são fenólicos, mas o reagente não distingue entre esses grupos.

C) Errada. O ácido tânico é padrão para taninos, não para flavonoides. Os resultados de flavonoides geralmente são expressos em equivalentes de rutina ou quercetina, compostos que representam melhor o grupo dos flavonoides.

D) Incorreta. A rutina é um flavonoide e não um tanino. Pelo contrário, ela pode e deve ser empregada como padrão para a curva de calibração em análises de flavonoides.

E) Equivocada. Flavonoides estão presentes em diversas amostras de própolis, principalmente de origem vegetal, como a própolis verde. A maceração é correta para preparo de extratos, mas a afirmação sobre ausência de flavonoides está errada.

Estrategicamente para concursos: Atente-se ao uso dos nomes de métodos e padrões e à especificidade dos grupos químicos analisados (taninos ≠ flavonoides). Provas gostam de confundir compostos fenólicos! Cuidado com pegadinhas de nomenclatura e associações inadequadas entre padrões e métodos analíticos.

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a) reagente Folin-Denis ou folin- ciocauteau é usado na determinação de fenóis totais.

b) correta

c) deve ser utilizado um flavonoides, a exemplo, quercetina e rutinana curva de calibração.

d) rutina é flavonoide

e) Própolis é uma mistura complexa, formada por material resinoso e balsâmico. Sua composição é complexa e variada e de acodo com a composição da flora de cada região. Inclui flavonoides, ácidos aromáticos, terpenoides e fenilpropanoides, ácidos graxos e vários outros compostos. fonte: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0102-695X2008000300020

O método de DPPH é muito utilizado para se determinar a atividade antioxidante em extratos e substâncias isoladas como: compostos fenólicos, fenilpropanoides, fenólicos totais, flavonóis, cumarinas, quitosana com diferentes pesos moleculares, antocianinas, antocianidinas, carotenoides, rutina e kaempferol.

A molécula de DPPH é caracterizada como um radical livre estável em virtude da deslocalização do elétron desemparelhado por toda a molécula. Tal deslocalização confere a esta molécula uma coloração púrpura, caracterizada por uma banda de absorção em etanol em cerca de 518 nm. 

Este ensaio se baseia na medida da capacidade antioxidante de uma determinada substância em sequestrar o radical DPPH, reduzindo-o a hidrazina. Quando uma determinada substância que age como doador de átomos de hidrogênio é adicionada a uma solução de DPPH, a hidrazina é obtida com mudança simultânea na coloração de púrpura a amarelo pálido), tal reação pode ser monitorada com decréscimo de absorbância em espectrofotômetro.