Vamos analisar cada uma das afirmativas para entender a questão sobre o armazenamento de culturas bacterianas a longo prazo.

I. A fase ideal de crescimento para congelar as bactérias é em sua fase estacionária.

Essa afirmativa está incorreta. A melhor fase para congelar bactérias é a fase exponencial de crescimento, não a fase estacionária. Na fase exponencial, as células estão mais viáveis e metabolicamente ativas, o que aumenta a probabilidade de sucesso na ressuscitação após o descongelamento.

II. A cultura feita em caldo deve ser centrifugada a 6000rpm por 15 minutos.

Esta afirmativa está incorreta. Embora a centrifugação seja uma etapa comum na preparação de culturas para armazenamento, os parâmetros específicos (como a velocidade e o tempo) podem variar dependendo do tipo de bactéria e do protocolo específico. Não há uma regra fixa de 6000rpm por 15 minutos para todas as culturas.

III. Adição de igual volume de glicerol a 10% na cultura a ser centrifugada.

Essa afirmativa está correta. O glicerol é um agente crioprotetor comumente usado para proteger as células bacterianas durante o congelamento. A adição de glicerol a uma concentração final de 10% é uma prática padrão para aumentar a viabilidade das bactérias quando congeladas.

IV. As culturas preparadas devem ser congeladas a –50°C ou mais frio.

Essa afirmativa está correta. Congelar culturas bacterianas a temperaturas de –50°C ou mais frias (como –80°C em ultrafreezers) é ideal para armazenamento a longo prazo, pois minimiza a degradação celular e mantém a viabilidade das bactérias.

Portanto, a alternativa C (afirmativas III e IV) é a correta.

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C - se somente as afirmativas III e IV estiverem corretas