Tema central: A RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) é a técnica molecular padrão para detectar RNA de vírus, como o SARS-CoV-2. O princípio: o RNA viral é convertido em cDNA por uma transcriptase reversa, e esse cDNA é amplificado por PCR com primers e, frequentemente, sondas fluorescentes (ex.: TaqMan) para detecção em tempo real.

Gabarito: D. A descrição está correta: há transcrição reversa do RNA viral em cDNA, seguida de amplificação específica com primers e sondas. Em RT-qPCR, a fluorescência aumenta proporcionalmente ao produto gerado, permitindo calcular o Ct (cycle threshold), indicador indireto da carga viral. Esse é o método recomendado por OMS/WHO e CDC para diagnóstico na fase aguda.

Análise das alternativas incorretas:

A) Fala em detecção de IgM/IgG, que são anticorpos. Isso é sorologia (ELISA/CLIA), não RT-PCR. A RT-PCR detecta material genético viral, não anticorpos do hospedeiro. Diretrizes (WHO/CDC) distinguem claramente NAAT (RT-PCR) de testes sorológicos.

B) Enzimas de restrição clivam DNA de dupla fita em sítios específicos; não são usadas para RNA viral na detecção. Além disso, a PCR convencional necessita de DNA molde; para vírus de RNA é indispensável a transcrição reversa prévia.

C) PCR não “amplifica proteínas”. Proteínas são analisadas por técnicas como imunocromatografia (testes de antígeno) ou Western blot. A RT-PCR atua sobre ácidos nucleicos (RNA→cDNA→amplificação).

E) RT-PCR requer ciclagem térmica (desnaturação ~95°C, anelamento ~50–65°C, extensão ~72°C). O método isotérmico em temperatura constante é o LAMP, não a RT-PCR. Logo, a assertiva confunde técnicas.

Dicas para provas (pegadinhas):

- “Anticorpos” → lembre: é sorologia, não RT-PCR.
- “Proteínas” → pense em teste de antígeno, não PCR.
- “Enzimas de restrição” → aplicáveis a DNA, não ao fluxo clássico da RT-PCR.
- “Temperatura constante” → remete a LAMP, não a PCR.

Aplicação clínica: Em suspeita de COVID-19 aguda, coleta-se swab naso/orofaríngeo, faz-se extração de RNA, RT para cDNA e amplificação com primers/sondas para genes-alvo (ex.: N, E, RdRp). Ct baixo sugere maior carga viral. Referências: WHO Diagnostic testing for SARS-CoV-2; CDC 2019-nCoV Real-Time RT-PCR Panel; UpToDate: COVID-19: Diagnosis; Harrison’s Principles of Internal Medicine.

Conclusão: A alternativa D descreve corretamente o fluxo técnico e conceitual da RT-PCR para SARS-CoV-2.

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