Tema central: Ferramentas clássicas da engenharia genética para clonagem e expressão gênica, base da produção de proteínas recombinantes e vacinas (por exemplo, vacinas de DNA e subunidades). Conceitos-chave: vetores (plasmídeos/fagos), enzimas de restrição (cortam), ligases (unem), polimerases (sintetizam DNA).

Alternativa correta: D – Ligases (como a T4 DNA ligase) catalisam a formação de ligações fosfodiéster entre fragmentos de DNA, juntando extremidades coesivas ou cegas e permitindo inserir DNA exógeno em um plasmídeo vetor. Esse passo é essencial na construção de vetores recombinantes usados para expressão de antígenos em vacinas e produção de proteínas terapêuticas. Referências: Alberts – Biologia Molecular da Célula; Brown – Gene Cloning and DNA Analysis; UpToDate – Principles of recombinant DNA technology.

Análise das alternativas incorretas

A) Plasmídeos são vetores que facilitam (e não impedem) a clonagem. Possuem origem de replicação, marcadores de seleção e “multiple cloning site” para inserção de genes. A afirmação contraria a função básica do plasmídeo (Watson – Recombinant DNA).

B) Fagos são bacteriófagos; infectam bactérias, não vírus patogênicos. Podem ser usados como vetores (λ, M13) para clonagem em bactérias, mas não para “modificar geneticamente vírus patogênicos” visando impedir sua replicação. A frase mistura alvos e mecanismos. Em vacinologia, a modificação de vírus patogênicos envolve vetores virais específicos (adenovírus, poxvírus), não fagos (Diretrizes OMS sobre plataformas de vacinas).

C) Enzimas de restrição reconhecem sequências específicas (sítios de restrição); diferentes enzimas cortam diferentes sítios. Existem exceções (isoschizômeros) que reconhecem o mesmo sítio, mas não é regra geral. A alternativa generaliza de forma incorreta (Lodish – Biologia Celular e Molecular).

E) DNA polimerase sintetiza DNA a partir de molde, não “une DNA ao mRNA”. Para obter DNA a partir de mRNA usa-se transcriptase reversa (formando cDNA). Ligação de fragmentos é papel da ligase, não da polimerase. A frase confunde síntese com ligação e mistura DNA–RNA indevidamente.

Estratégia de prova: Associe verbos às ferramentas: cortar → restrição; unir → ligase; replicar/sintetizar → polimerase; transportar → vetor (plasmídeo/fago). Desconfie de afirmações que misturam alvos (fagos ≠ vírus) e de generalizações absolutas sobre enzimas.

Aplicação clínica/veterinária: A montagem de plasmídeos com antígenos, usando restrição + ligase, viabiliza vacinas recombinantes e de DNA em Medicina e Veterinária (OMS/FAO/OIE – guias de vacinas recombinantes).

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A) Errada – Plasmídios são vetores usados para clonar genes, não para impedir a clonagem.

B) Errada – Fagos podem ser usados como vetores

C) Errada – Enzimas de restrição não cortam todas no mesmo sítio; cada uma reconhece uma sequência específica.

E) Errada – DNA polimerase NÃO une DNA ao RNA mensageiro.