Tema central: A RT-PCR é uma técnica molecular que detecta transcritos específicos de RNA, como o BCR-ABL nas leucemias Philadelphia positivas (CML e parte das LLA-B). O ponto-chave: antes da PCR, é preciso converter o mRNA em DNA para que a polimerase possa amplificar.

Alternativa correta: E — DNA complementar (cDNA)

Na RT-PCR, a transcriptase reversa usa o mRNA como molde e sintetiza cDNA. Só então a PCR amplifica esse cDNA com primers que flanqueiam a junção de fusão BCR-ABL1. Isso permite detectar e quantificar os transcritos (ex.: p210 b2a2/b3a2; p190 e1a2), fundamentais para diagnóstico e monitoramento de resposta molecular.

Contexto clínico-laboratorial

Nas leucemias Ph+, além de cariótipo e FISH, a RT-qPCR para BCR-ABL1 é padrão para confirmar o rearranjo e acompanhar doença residual mínima. Diretrizes (NCCN CML 2024; WHO 2022; UpToDate; Harrison’s) recomendam quantificação padronizada (escala internacional) no seguimento de CML.

Análise das alternativas

• A) Proteína de fusão BCR-ABL: produto traduzido (proteico), não é gerado por RT-PCR. A técnica detecta ácido nucleico, não proteína. Proteínas são avaliadas por western blot ou imunotestes.
• B) RNA ribossômico: rRNA é abundante e pode servir como controle de integridade, mas não é o alvo da RT-PCR para BCR-ABL. O alvo é o mRNA do gene de fusão.
• C) DNA genômico: a PCR convencional pode usar DNA genômico, mas no BCR-ABL os pontos de quebra genômicos são variados e intrônicos. Por isso, usa-se o mRNA (exônico) convertido em cDNA, garantindo detecção sensível e específica.
• D) Enzima transcriptase reversa: é o reagente adicionado na reação, não o produto formado. O produto do primeiro passo é o cDNA.
• E) DNA complementar (cDNA): correta. É o DNA sintetizado a partir do mRNA pela transcriptase reversa; serve de molde para a PCR.

Estratégia para a prova: Ao ler “RT-PCR” + “mRNA”, associe imediatamente o primeiro passo à síntese de cDNA. Desconfie de opções que descrevem proteínas (produto de tradução) ou reagentes (enzimas) como se fossem o produto da reação.

Referências essenciais: Harrison’s Principles of Internal Medicine (21ª ed.); WHO Classification of Tumors of Hematolymphoid Tissues (2022); NCCN Guidelines: Chronic Myeloid Leukemia (2024); UpToDate – Clinical use of BCR-ABL1 testing.

Gabarito: E

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