Para resolver a questão proposta, precisamos entender o procedimento de uma PCR padrão (Reação em Cadeia da Polimerase). A PCR é uma técnica amplamente utilizada em laboratórios de biologia molecular para amplificar fragmentos específicos de DNA. A reação de PCR passa por uma série de etapas cíclicas que incluem: desnaturação, anelamento e elongação.

Justificativa para a alternativa correta:

A alternativa A afirma: "Resfriamento da amostra a 16 °C por 30 segundos a cada ciclo". Esta etapa não é típica de uma PCR padrão. As etapas da PCR ocorrem a temperaturas mais altas: a denominação não inclui um resfriamento a 16°C.

Análise das alternativas incorretas:

B - Anelamento dos iniciadores no DNA alvo a 55 °C por um minuto a cada ciclo: Esta é uma etapa padrão na PCR. Durante o anelamento, os primers se ligam à fita simples de DNA, geralmente em torno de 50-65°C, dependendo da sequência do primer.

C - Desnaturação da amostra a 95 °C por 40 segundos a cada ciclo: A desnaturação é a primeira etapa de cada ciclo de PCR. Nesta fase, o DNA de dupla hélice é separado em duas fitas simples por aquecimento a altas temperaturas (95°C).

D - Alongamento/Polimerização a 72 °C por um minuto a cada ciclo: O alongamento é a fase onde a DNA polimerase sintetiza uma nova fita de DNA, e 72°C é a temperatura ótima para a atividade da Taq polimerase, a enzima mais comumente usada na PCR.

E - Desnaturação inicial da amostra a 95°C por cinco minutos: Antes de iniciar os ciclos, uma desnaturação inicial é realizada para garantir que todo o DNA alvo esteja em fitas simples. Esta etapa é usualmente feita a 95°C.

Com base na descrição das etapas de uma PCR, fica claro que a etapa mencionada na alternativa A não faz parte do procedimento padrão, tornando-a a resposta correta.

Gostou do comentário? Deixe sua avaliação aqui embaixo!

a)Resfriamento da amostra a 16 °C por 30 segundos a cada ciclo. (ERRADA) O resfriamento necessário para o anelamento é entre 30 e 65°C. 

GABARITO A - Não tem etapa de resfriamento a cada ciclo.

As etapas da PCR são:

Desnaturação--> Anelamento--> Extensão.

A PCR ocorre por ciclos de temperatura controlada por um termociclador.

Em alguns casos, pode ocorrer uma etapa de desnaturação inicial e outra de extensão final. No caso, o programa seria:

Etapa 1: desnaturação inicial (normalmente 95°C por 5 min)

Etapa 2: Ciclos: entre 20-40

Desnaturação (95°C): temperatura elevada para romper as ligações de hidrogênio e expor o gene alvo. Lembrando que quanto mais porcentagem de CG no DNA, maior o tempo dessa etapa.

Anelamento (~55°C): temperatura diminui para ocorrer o anelamento dos primers no gene alvo.

Extensão (72°C): temperatura aumenta novamente, para o ponto ótimo de funcionamento da enzima Taq DNA polimerase (termoestável). Aqui ocorre a inserção dos dNTPs para amplificação do gene alvo.

Etapa 3: extensão final (72°C por 5 min)

Como pode-se observar, a PCR não faz resfriamento, como indicado na letra A.