A questão aborda o tema da hibridização subtrativa, uma técnica poderosa usada na biologia molecular para identificar genes diferencialmente expressos entre dois grupos de amostras, como tecidos normais e tumorais. Este método é fundamental para a pesquisa biomédica, pois permite a descoberta de genes envolvidos em processos patológicos.

Vamos analisar cada alternativa para entender por que a opção correta é a letra B - Hidrólise alcalina dos cDNA obtidos após a hibridização.

A - Clonagem do cDNA remanescente da etapa de hibridização para construção da biblioteca subtrativa: Esta etapa é essencial. Após a hibridização, os cDNAs remanescentes, que representam genes diferencialmente expressos, são clonados para formar uma biblioteca subtrativa. Isso permite a posterior identificação e análise dos genes de interesse.

C - Extração e preparação do ácido nucléico para a hibridização subtrativa: Esta é uma etapa inicial crítica, onde os ácidos nucleicos (geralmente RNA) são extraídos e preparados para gerar cDNA, que será utilizado na hibridização subtrativa.

D - Avaliação dos clones obtidos: Após a construção da biblioteca subtrativa, os clones são avaliados para identificar quais genes estão diferencialmente expressos. Esta etapa é vital para validar os resultados obtidos.

E - Preparação e marcação das sondas para seleção da biblioteca subtrativa de cDNA: As sondas são preparadas e marcadas para facilitar a identificação dos cDNAs de interesse. Isso é crucial para a seleção bem-sucedida dos genes diferencialmente expressos.

Por que a alternativa B está correta? A hidrólise alcalina dos cDNAs não faz parte do procedimento padrão da hibridização subtrativa. A hidrólise alcalina é uma técnica usada para quebrar RNA, mas não é utilizada neste contexto para manipular cDNA pós-hibridização. Assim, essa etapa não é necessária e está fora do escopo do método usual de hibridização subtrativa.

Em resumo, compreender as etapas envolvidas na hibridização subtrativa é crucial para diferenciar quais processos são necessários e quais não se aplicam, como no caso da hidrólise alcalina de cDNA.

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Gab B

O DNA não é susceptível a hidrólise alcalina, enquanto o RNA é facilmente hidrolisado, produzindo uma mistura equimolar de 2’e 3’-nucleosídeo monofosfato.