Tema central: teste de sensibilidade a antimicrobianos por disco-difusão (método de Kirby-Bauer). Baseia-se em: inóculo padronizado (0,5 McFarland) de cultura pura, semeadura em ágar Mueller-Hinton, aplicação de discos com concentração fixa de antibióticos, incubação padronizada e medida do diâmetro do halo (mm) com interpretação por tabelas (CLSI/EUCAST).

Alternativa correta: C — Após isolar a bactéria, prepara-se suspensão padronizada e semeia-se o ágar sólido; em seguida, aplicam-se discos de papel com concentrações predefinidas de antimicrobianos. Esse é o princípio do método, garantindo difusão radial e formação de zonas de inibição proporcionais à suscetibilidade. Referência: CLSI M02/M100; EUCAST Disk Diffusion Method.

Por que as demais estão incorretas?

A — Testar microrganismos diferentes na mesma placa viola a padronização: pode haver sobreposição de halos e interações que impedem leitura confiável. A norma recomenda um isolado por placa com inóculo 0,5 McFarland (CLSI/EUCAST).

B — O Mueller-Hinton é o meio recomendado para a maioria dos bacilos Gram-negativos e cocos Gram-positivos não fastidiosos por sua boa reprodutibilidade, composição controlada (cátions) e crescimento adequado. Exceções fastidiosas usam MH modificado/adições (ex.: 5% sangue para Streptococcus; meios específicos para Haemophilus) — não se “evita” o MH; adapta-se quando necessário (CLSI M02; EUCAST).

D — A interpretação não é dicotômica apenas “sensível”/“resistente”. As categorias incluem S (sensível), I (intermediário; EUCAST: “susceptible, increased exposure”), e R. A decisão depende do diâmetro medido e dos pontos de corte por agente/organismo (CLSI M100; EUCAST Breakpoints). Reduzir a S/R perde informação clínica.

E — Não basta presença/ausência de halo. É obrigatório medir o diâmetro (mm) e compará-lo às tabelas para definir S/I/R. Ignorar o tamanho conduz a erros, especialmente em halos limítrofes (p. ex., detecção de mecanismos como ESBL e alterações de permeabilidade) (CLSI/EUCAST).

Dicas para a prova: identifique palavras-chave como Mueller-Hinton, 0,5 McFarland, medida em mm, tabelas CLSI/EUCAST e “um isolado por placa”. Cuidado com pegadinhas que: desqualificam o MH (falso), propõem leitura só pela presença de halo (inadequado) ou oferecem apenas S/R (incompleto).

Referências essenciais: CLSI M02 e M100 (últimas edições); EUCAST Disk Diffusion Method (v.2024); UpToDate – Antimicrobial susceptibility testing overview; Baron's Medical Microbiology.

Gabarito: C

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A) "Normalmente diferentes tipos de micro-organismos são testados em uma mesma placa do teste de sensibilidade." Incorreta. Normalmente testa-se um único microrganismo por placa.

B) "Evita-se o uso do meio de cultura Mueller-Hinton, pois este apresenta baixa reprodutibilidade e não permite crescimento satisfatório dos patógenos não fastidiosos." Incorreta. Pelo contrário, o Mueller-Hinton é o meio de cultura preferencial para o TSA, pois apresenta boa reprodutibilidade e permite o crescimento satisfatório de patógenos não fastidiosos.

C) Correta.

D) A medida do halo de crescimento (inibição) é analisada conforme tabela de interpretação, e o resultado da susceptibilidade da bactéria é convertido para “sensível” ou “resistente”.

E) "Os testes de disco-difusão baseados apenas na presença ou ausência de um halo de inibição, sem consideração do tamanho do halo, são aceitáveis." Incorreta. Deve-se sim levar em consideração o tamanho do halo de inibição.

alternativa correta: [C] Após o isolamento bacteriano, a partir do crescimento puro do caldo inocula-se uma placa com meio de cultura sólido, na qual se adicionam discos de papel de filtro com concentração fixa de antibióticos.

justificativa:

No método de disco-difusão, após o isolamento puro da bactéria, realiza-se a inoculação de um meio de cultura sólido (geralmente o ágar Mueller-Hinton) com a cepa bacteriana. Em seguida, colocam-se discos de papel impregnados com antibióticos em concentrações fixas sobre a superfície da placa, e a inibição do crescimento bacteriano ao redor dos discos é observada, indicando a eficácia do antibiótico.

análise das demais alternativas:

• [A] Incorreto: Não é usual testar diferentes tipos de micro-organismos na mesma placa, pois o teste é geralmente feito para uma única bactéria por vez, a fim de garantir a precisão da interpretação dos resultados.
• [B] Incorreto: O meio de cultura Mueller-Hinton é o mais comum e preferido para este teste, pois oferece boa reprodutibilidade e permite o crescimento adequado da maioria dos patógenos, incluindo os não fastidiosos.
• [D] Correto: Após o teste, o tamanho do halo de inibição é medido e comparado com uma tabela de interpretação. Isso permite a classificação da bactéria como "sensível" ou "resistente" ao antibiótico testado.
• [E] Incorreto: A presença ou ausência de um halo é importante, mas o tamanho do halo é o critério chave para determinar a resistência ou sensibilidade da bactéria ao antibiótico.

resumo: A alternativa correta descreve adequadamente a metodologia do teste de sensibilidade a antimicrobianos, que envolve a inoculação do meio sólido e a aplicação dos discos de antibióticos.

pontos chave:

→ A inoculação da placa é feita com o crescimento puro da bactéria.

→ Discos impregnados com antibióticos são colocados sobre o meio sólido.

→ A medição do halo de inibição indica a eficácia dos antibióticos.