Tema central: Na scRNA-seq (sequenciamento de RNA de célula única), a etapa de captura de RNA é crucial para isolar e rotular o mRNA de cada célula, permitindo identificar quais genes estão sendo expressos por célula. Isso geralmente ocorre após lise celular, quando o mRNA poliadenilado (poli-A) é hibridizado por oligo-dT acoplado a suportes (esferas/partículas) que também carregam barcodes celulares e UMIs (identificadores únicos de molécula).

Alternativa correta: A — A captura por oligo-dT que se ligam à cauda poli-A do mRNA é o método-padrão em scRNA-seq (ex.: Drop-seq, 10x Genomics, Smart-seq2). Essa estratégia seleciona mRNA, minimizando rRNA/tRNA e viabilizando a síntese de cDNA e a posterior amplificação. Em muitas plataformas, as esferas/micropartículas contêm oligos com sequência oligo-dT + barcode celular + UMI, garantindo rastreabilidade por célula e por molécula.

Como identificar a correta em prova: Procure por termos como poli-A, oligo-dT, barcodes e UMIs. Desconfie de afirmações absolutas do tipo “exclusivamente”, “sem amplificação” ou “alta temperatura” nesta etapa.

Por que as demais estão incorretas?

• B — “Exclusivamente por sondas específicas e sem amplificação”: scRNA-seq padrão é global (baseada em poli-A), não restrita a genes de interesse. Mesmo em painéis targeted, a amplificação (PCR ou IVT) é necessária devido ao baixo input por célula.
• C — “Filtração mecânica por tamanho”: não é assim que se captura RNA. Filtração/seleção por tamanho pode ocorrer na construção da biblioteca de cDNA, não para isolar mRNA nativo, pois RNAs têm tamanhos sobrepostos e a abordagem é por hibridização, não por peneiramento.
• D — “Alta temperatura para desnaturar”: a hibridização oligo-dT–poli-A e a captura ocorrem em temperaturas moderadas. Temperaturas elevadas aumentam o risco de degradação de RNA. A etapa de transcrição reversa costuma ocorrer a ~42–55°C, mas isso não caracteriza a “captura��� em si.
• E — “Captura não seletiva de todos os RNAs”: o fluxo de trabalho clássico é seletivo para mRNA (poli-A). rRNA/tRNA são abundantes e, se capturados, diluem o sinal do mRNA. Protocolos de RNA total existem, mas requerem depleção de rRNA e não representam a prática padrão.

Aplicação prática em Biomedicina: Essa seletividade por mRNA permite mapear tipos celulares e estados funcionais em tecidos (ex.: tumores, inflamação, hematopoese), auxiliando no entendimento de heterogeneidade celular relevante para diagnóstico e pesquisa translacional.

Referências essenciais: Picelli et al., Nat Protoc 2014 (Smart-seq2); Macosko et al., Cell 2015 (Drop-seq); Documentação 10x Genomics Chromium; “Molecular Biology of the Cell” (Alberts) e “Current Protocols in Molecular Biology”.

Gabarito: A

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