Gabarito: C — biopanning

Tema central (Imunologia aplicada): O phage display permite expor fragmentos de anticorpos (ex.: scFv) na superfície de bacteriófagos, gerando bibliotecas com enorme diversidade. O desafio é selecionar apenas os clones que de fato se ligam ao antígeno de interesse.

Por que a alternativa C está correta: Biopanning é o processo de seleção iterativa dos fagos ligantes. Em linhas gerais: (1) imobiliza-se o antígeno (placas, beads, células), (2) incuba-se a biblioteca de fagos, (3) realiza-se lavagens de alta stringência para remover não ligantes, (4) elui-se os fagos que permaneceram ligados, (5) amplifica-se em bactérias e (6) repete-se por rodadas sucessivas, enriquecendo os melhores ligantes. É a técnica-padrão para isolar clones específicos em phage display (Smith, Science 1985; McCafferty et al., Nature 1990; Current Protocols in Immunology).

Análise das alternativas incorretas:

A – Clonagem: etapa de construção/manutenção da biblioteca (inserção de genes em vetores), mas não seleciona ligantes com base em afinidade/especificidade. É pré-requisito, não o método de isolamento.

B – ELISA: detecta e quantifica ligação antígeno-anticorpo. Pode ser usado após o biopanning (phage-ELISA) para triagem e caracterização, porém não realiza a seleção a partir de uma biblioteca complexa.

D – Citometria de fluxo: útil para seleção em yeast display ou cell display via FACS, quando as partículas são fluorescentes/celulares. Em phage display clássico, a seleção principal é o biopanning; citometria não é a via usual de isolamento de fagos ligantes.

E – Western blot: técnica para detecção de proteínas (sobretudo desnaturadas) por anticorpos. Não enriquece clones por afinidade nem seleciona ligantes funcionais de bibliotecas de fagos.

Estratégia para a prova: Palavras-chave como “biblioteca de fagos”, “isolar clones ligantes” e “seleção iterativa” apontam diretamente para biopanning. Cuidado com a pegadinha do ELISA: ele mede ligação, mas não “peneira” a biblioteca; quem enriquece é o biopanning.

Aplicação prática em laboratório: Após 2–4 rodadas de biopanning, os clones são testados por phage-ELISA e sequenciados; os melhores seguem para expressão/purificação e caracterização (afinidade por SPR/BLI). Referências: Current Protocols in Immunology; Barbas et al., Phage Display: A Laboratory Manual; UpToDate (tópicos de engenharia de anticorpos) para visão geral translacional.

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