Tema central: Seleção de hibridomas na produção de anticorpos monoclonais usando o meio HAT. O princípio baseia-se nas vias de síntese de nucleotídeos: a via de novo (bloqueada por antifolatos) e a via de salvamento (requer enzimas como HGPRT e timidina quinase).

Alternativa correta: C
No meio HAT (Hipoxantina, Aminopterina, Timidina), a aminopterina (antifolato) inibe a via de novo de purinas e timidilato. Assim, as células só sobrevivem se usarem a via de salvamento, que depende de HGPRT (hipoxantina → IMP) e TK (timidina → dTMP). Linhagens de mieloma HGPRT− não conseguem usar hipoxantina e morrem; esplenócitos normais têm HGPRT/TK, mas são mortais in vitro. Apenas os hibridomas (mieloma + esplenócito) combinam imortalidade com enzimas de salvamento, sobrevivendo no HAT. Referências clássicas: Janeway’s Immunobiology; Kuby Immunology; protocolos de HAT em UpToDate/Nature Protocols.

Por que as outras estão erradas?

A) PEG é usado para promover a fusão celular, não para selecionar. Não bloqueia a via de novo e não “mata” mielomas HGPRT−. A seleção ocorre após a fusão, com HAT.

B) Diz que no HAT a via de novo é impedida pela timidina. Falso. A timidina é substrato da via de salvamento (pela TK), permitindo síntese de dTMP quando a via de novo está bloqueada pela aminopterina.

D) Atribui o bloqueio da via de novo à hipoxantina. Falso. A hipoxantina também é substrato de salvamento (pela HGPRT) para formar IMP/GMP. Quem bloqueia é a aminopterina.

E) DMEM é um meio basal e não seleciona hibridomas. Sem HAT, os mielomas não fundidos (HGPRT−) sobrevivem via de novo e superam os hibridomas; esplenócitos morrem por serem finitos, mas isso não gera seleção específica.

Dicas de prova e pegadinhas:

- Associe: HAT = de novo bloqueada por aminopterina; sobrevivência apenas por salvamento (HGPRT/TK).
- Hipoxantina e timidina são doadores para o salvamento, não inibidores.
- PEG é para fusão, não para seleção.
- Lembre: mieloma HGPRT− morre no HAT; esplenócito é mortal; hibridoma tem imortalidade + HGPRT → sobrevive.

Fontes de estudo: Janeway’s Immunobiology (cap. sobre anticorpos monoclonais), Kuby Immunology, UpToDate – Principles of hybridoma technology.

Gabarito: C

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