Tema central: técnicas de alto rendimento para mapear, em nível de célula única, a relação entre o BCR (receptor de células B) e a especificidade por antígenos usando antígenos com códigos de barras (DNA-barcodes) e plataformas de droplet microfluidics (10x Genomics). Isso permite amostrar 10⁵–10⁷ células com precisão.

Alternativa correta: D

No método LIBRA-seq (Linking BCR to Antigen Specificity through Sequencing), células B são incubadas com um painel de antígenos que possuem fluoróforos e DNA-barcodes únicos. As células que se ligam são isoladas por citometria de fluxo (FACS). Em seguida, usa-se a plataforma 10x Genomics para capturar, por célula, as sequências V(D)J do BCR (cadeias pesada e leve) e os códigos de barras dos antígenos internalizados/coencapsulados, ligando diretamente sequência do BCR à especificidade antigênica. Esse é o coração do LIBRA-seq e explica seu alto rendimento e resolução de célula única. Evidências: Setliff et al., Nat Biotechnology 2019; documentação 10x Genomics Feature Barcode + V(D)J.

Por que as demais estão incorretas?

A) Substitui o sequenciamento por Cryo-EM, técnica de biologia estrutural para visualizar complexos antígeno–anticorpo, não para mapear BCR e especificidade em massa. Não integra barcodes nem single-cell V(D)J (incompatível com LIBRA-seq).

B) Propõe microplacas e Sanger: ambos são baixo rendimento, inviáveis para 10⁵–10⁷ células e não capturam simultaneamente BCR + barcode do antígeno como no pipeline 10x.

C) Usa imunocromatografia e alega identificar barcodes por imunofluorescência. Os barcodes do LIBRA-seq são DNA, detectados por sequenciamento, não por anticorpos/IF. Além disso, Sanger novamente limita o rendimento.

E) Diz antígenos não marcados e, ao mesmo tempo, fala em “antígenos com código de barras” — contradição. No LIBRA-seq, os antígenos precisam estar DNA-barcoded (e geralmente fluorescentes) para seleção por FACS e leitura por 10x.

Dicas de prova (estratégia):

• Associe as palavras-chave: “código de barras de antígeno” + “citometria de fluxo” + “10x Genomics (V(D)J + Feature Barcode)” → LIBRA-seq.
• Desconfie de métodos baixo rendimento (Sanger, microplacas) e de técnicas fora de escopo (cryo-EM) quando o enunciado exigir milhões de células.
• Lembre: o barcode é DNA → deve ser lido por sequenciamento, não por IF.

Referências rápidas: Setliff M. et al., Nature Biotechnology, 2019 (descrição original do LIBRA-seq); 10x Genomics – V(D)J + Feature Barcode (aplicações de antígenos DNA-barcoded); Abbas, Cellular and Molecular Immunology (BCR e V(D)J) para base conceitual.

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