Para realização do TSA pela metodologia de disco-difusão de espécies bacterianas sem grandes exigências nutricionais (bactérias não fastidiosas) deve ser empregando o meio de cultura Müeller-Hinton ágar.

A densidade da suspensão do inóculo bacteriano deve ser ajustada de acordo com a turbidez equivalente a 0,5 da escala de McFarland. 

Com algumas exceções, as bordas dos halos dos discos de antimicrobianos devem ser lidos no ponto de completa inibição de crescimento, visto a olho nu, com a placa posicionada a cerca de 30 cm dos olhos. Ler as placas de ágar Müeller-Hinton (não suplementadas) pelo seu fundo, com luz refletida contra um fundo escuro.

Interpretar os diâmetros dos halos de inibição de acordo com valores de pontos de corte contidos nas Tabelas de Pontos de Corte, disponível no site do BrCAST (http://brcast.org.br). 

A técnica de disco-difusão é o método recomendado (padrão-ouro) para a detecção de resistência aos glicopeptídeos, como a vancomicina, em Staphylococcus aureus.