Analise as afirmativas abaixo em relação às características das culturas primárias e linhagens permanentes.

I. Culturas primárias podem permanecer em divisão por um longo tempo, porém o número de divisões é sempre finito.

II. A obtenção de uma linhagem permanente pode acontecer a partir de uma modificação que aconteça aleatoriamente em uma ou poucas células presentes em uma cultura, dando-lhe(s) a característica de proliferação indefinida. Alternativamente, esta característica pode ser obtida a partir da transformação das células primárias por exemplo por infecção por vírus carcinogênico.

III. As culturas primárias normais sempre darão origem naturalmente à linhagens celulares permanentes ou contínuas.

Assinale: 

A fim de garantir a homogeneidade e a reprodutibilidade da experimentação envolvendo culturas celulares, é necessário que, antes da utilização de células para montagem de experimentos, seja realizada a contagem das mesmas. Todas as afirmativas abaixo se relacionam ao procedimento correto de contagem e ao cálculo do número de células em uma suspensão, exceto uma. Assinale-a.

O subcultivo da maioria das células aderentes envolve a utilização da protease tripsina e do sal EDTA. Sobre o motivo da utilização destes reagentes no procedimento de subcultivo celular, analise as afirmativas a seguir.

I. As células aderem à superfície inferior da garrafa de cultivo e umas as outras pelas proteínas que compõe a matriz extracelular. Enquanto a tripsina reconhece e cliva regiões nativas destas proteínas, a função do EDTA é quelar os íons Ca²⁺, que são requeridos para a ligação célula-célula mediada pelas caderinas. Desta forma, tanto o EDTA quanto a tripsina servirão para promover o destacamento das células do frasco de cultivo e sua separação.

II. As células são cultivadas geralmente na presença de soro que fornece fatores de crescimento necessários para a divisão celular. A fim de realizar o subcultivo é necessário eliminar o soro presente no meio. A tripsina irá clivar as proteínas do soro e o EDTA facilitará a formação de agregados protéicos que serão facilmente removidos ao se descartar este meio, promovendo assim a retirada do soro do meio de cultivo.

III. As células aderem à superfície inferior da garrafa de cultivo e umas as outras através das proteínas que compõe a matriz extracelular. A tripsina reconhece e cliva regiões nativas destas proteínas e a função do EDTA é servir de co-fator para a tripsina aumentando sua atividade. Desta forma, promovendo o destacamento das células do frasco de cultivo e sua separação.

Assinale:

Assinale a alternativa incorreta.

Assinale a alternativa que explicita um item que não é necessário incluir nos procedimentos operacionais padrões (POPs).

Sabe-se que a viabilidade celular é um importante parâmetro de controle para a manutenção dos bancos celulares, sejam oriundos de sistemas procarióticos ou eucarióticos. No entanto, outros parâmetros são descritos para o controle preciso destes materiais.

Assinale a afirmativa incorreta.

Em relação à estabilidade genética do Sistema de banco de células, várias metodologias são compatíveis para avaliação das linhagens celulares e listadas a seguir, exceto,:

Em relação aos aspectos gerais de cultura de células primárias e linhagens celulares, analise as afirmativas a seguir.

I. As culturas celulares apresentam freqüentemente muitas propriedades diferenciadas: fibroblastos continuam a secretar colágeno; células derivadas de músculo esquelético embrionário fusionam-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são eletricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; e células epiteliais formam extensivas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto.

II. A otimização de meios de cultivo para as culturas celulares tem sido um desafio para o setor industrial. Meios sem soro e meios quimicamente definidos são alvos de pesquisas. Os meios definidos contêm uma ou mais proteínas específicas as quais a maioria das células necessita para sobreviver e proliferar em cultura. Estas atuam como fatores de crescimento, estimulando a proliferação celular e outras funções como, por exemplo, a transferina, que transporta cálcio e potássio para dentro das células através de canais apropriados.

III. Meios quimicamente definidos sem soro tem facilitado a sobrevivência, desenvolvimento e proliferação de tipos específicos de células, como por exemplo, as utilizadas para a produção de moléculas sinalizadoras protéicas extracelulares.

Assinale:

As culturas de células animais podem ser classificadas de acordo com sua origem e biologia em: culturas primárias e linhagens celulares. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. São denominadas linhagens celulares finitas, as células capazes de um número limitado de duplicações, após o qual a proliferação cessa e linhagens celulares contínuas aquelas a serem propagadas e expandidas.

II. As linhagens celulares imortalizadas podem ocorrer espontaneamente (sendo um acontecimento raro) ou após transformação, que pode ser induzida por agentes químicos carcinogênicos, por introdução no genoma da célula de um gene viral ou um oncogene capaz de ultrapassar a senescência ou ainda recorrendo à infecção com vírus.

III. As células diplóides têm características de senescência e acabam por morrer em cultura após um número definido de gerações. A grande desvantagem deste tipo de células é que elas apresentam crescimento lento, não atingem altas densidades celulares, têm produtividade relativamente baixa e são altamente dependentes de adesão em suportes para o crescimento.

Assinale:

O avanço científico tem permitido o emprego industrial de microorganismos ou células modificadas geneticamente, visando produção de proteínas de interesse em diversas áreas, especialmente na saúde humana. O cultivo e a manutenção das células modificadas é ponto fundamental de controle e monitoramento dos diferentes produtos. Em relação ao tema cultura de células primárias e de linhagens, analise as afirmativas a seguir.

I. As culturas primárias são isoladas diretamente de órgãos ou tecidos. São denominadas primárias até a sua primeira passagem ou diluição, após o que são consideradas sub-culturas.

II. As linhagens celulares contínuas possuem crescimento celular mais rápido podendo-se atingir altas densidades celulares em biorreatores.

III. Uma grande desvantagem das linhagens celulares contínuas é a acentuada instabilidade cromossômica, maiores variações relativamente aos fenótipos de origem e o desaparecimento de marcadores específicos e característicos do tecido de origem.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir:

I. Muitas linhagens celulares são consideradas de adesão, isto porque nas células atuam forças atrativas intermoleculares. O mecanismo de adesão envolve quatro fases: adsorção, contato, junção e propagação.

II. A adesão celular foi considerada um elemento chave de evolução. A adesão célula-célula foi essencial ao desenvolvimento de organismos multicelulares e representa juntamente com a adesão célula-matriz um papel fundamental na regulação gênica.

III. Os cultivos celulares de adesão possuem maiores rendimentos se forem realizados em Frasco Spinner quando comparados com os cultivos estáticos.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir.

I. O emprego da tecnologia de cultura de células em microcarregadores permite o aumento da capacidade de produção das moléculas terapêuticas, devido à razão extremamente alta entre a área da superfície e o volume disposto pelos microcarregadores. Muito empregado para as culturas de adesão.

II. Os materiais usados para fabricação dos microcarregadores são de natureza porosa. Dependendo da dimensão dos poros, eles são classificados em microporosos e macroporosos.

III. Os microcarregadores microporosos consistem de partículas com dimensões de 0,4 a 5 mm com cavidades internas que permitem a adesão e o crescimento das células em seu interior. Este tipo de microcarregador foi desenvolvido com a finalidade de permitir o crescimento das células de forma tridimensional de modo a atingir altas concentrações.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir:

I. Para os cultivos celulares em tanques agitados existem vários sistemas de transferência de oxigênio, como aspersão direta, micro-aspersão e difusão por membranas.

II. Ao se estudar a cinética de crescimento de células cultivadas em biorreatores, percebe-se que a velocidade específica de respiração das células animais é consideravelmente menor que a de células microbianas.

III. As estratégias de controle da concentração de oxigênio dissolvido estão associadas ao termo de transferência de oxigênio de uma equação de balanço de massa, onde o k_La é o coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio e pode ser facilmente alterado manipulando-se a freqüência de agitação ou a vazão de aeração.

Assinale:

A maioria das proteínas de uso terapêutico consiste de moléculas complexas e glicosiladas expressas em diferentes sistemas de expressão e linhagens celulares. Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir:

I. No monitoramento dos cultivos celulares em biorreatores, parâmetros como: temperatura, pH, concentração de oxigênio dissolvido e nutrientes, são medidos on-line nos controles de processo realizados durante o cultivo.

II. Assim como no cultivo de células procarióticas, as células eucarióticas nos biorreatores possuem resistência mecânica e o monitoramento das taxas de transferência de oxigênio não chega a ser fator limitante nos cultivos contínuos.

III. Os sistemas de controle da temperatura utilizados em cultivos celulares são a manta térmica envolvendo o biorreator e os consagrados encamisamentos por água com sensor de temperatura.

Assinale:

A biotecnologia ocupa uma posição cada vez mais importante na produção de medicamentos, em geral inovadores e relevantes no tratamento de doenças críticas. Estes medicamentos são chamados também de biofármacos (proteínas terapêuticas). Em relação ao tema analise as afirmativas a seguir:

I. Se as proteínas terapêuticas não forem bem caracterizadas quanto a sua estabilidade, podem ser degradadas e gerarem reações imunogênicas de alto impacto na sua efetividade como eventos adversos.

II. O tamanho da estrutura molecular das proteínas terapêuticas é da ordem de 100 vezes maior que a estrutura de uma molécula química. O tamanho e a complexidade da estrutura destas proteínas conferem características tridimensionais relevantes para a sua atividade biológica.

III. O princípio ativo de uma proteína terapêutica é fortemente dependente do processo de purificação. Assume-se que pequenas mudanças na conformação de uma proteína amplamente conhecida (insulina), oriundas do processo de purificação, não afetam sua antigenicidade e consequentemente sua imunogenicidade.

Assinale:

O cultivo celular é um conjunto de técnicas que permitem propagar ou manter células isoladas fora do organismo, sem alteração das suas características próprias. Uma célula recombinante que expressa o gene da proteína GSCF apresentou em sua fase exponencial de crescimento, uma velocidade específica de crescimento de 0,57 h^-1, sabe-se que a carga genética contribui para este parâmetro. Desta forma, pode-se definir que o tempo de duplicação da cultura foi de (dado Ln 2 = 0,7):

Os cultivos celulares são considerados, na literatura em geral, como processos aeróbicos. Assim sendo, o oxigênio deve estar disponível em níveis adequados para garantir a produção de energia para a célula. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Altas concentrações de oxigênio podem permitir a formação de radicais livres e induzir toxicidade. Uma faixa ótima de saturação de ar seria entre 10 a 15%.

II. Adição de agentes como β-mercaptoetanol protegem as células dos radicais livres e diminuem a toxicidade dos radicais livres.

III. O controle preciso da temperatura de cultivo celular é fundamental para as linhagens celulares. No caso das linhagens de mamífero, temperaturas acima de 40 °C induzem na maioria das vezes a morte celular.

Assinale:

Do ponto de vista topológico, todas as camadas das células bacterianas (membrana, parede celular) são superfícies fechadas em si mesmas, fisicamente contínuas para manter a integridade e viabilidade da célula.

Em relação à biossíntese do peptídeoglicano de mureína, assinale a afirmativa incorreta.

Um fragmento de ADN, contendo um gene humano, por exemplo, pode ser unido ao ADN de um vetor e a nova molécula de ADN formada pode então ser introduzida numa célula hospedeira (por exemplo, uma bactéria). O vetor utilizado desta maneira é chamado vetor de clonagem e o ADN propagado por inserção num destes vetores é chamado de clone. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Os vetores de clonagem são pequenas moléculas lineares de ADN fita dupla, derivados de plasmídeos maiores que ocorrem naturalmente nas células bacterianas.

II. Os vetores de clonagem possuem um sítio único de clonagem, permitindo a inserção sítio-específica de outra molécula de ADN (o inserto).

III. O vetor de expressão tem como objetivo gerar o produto gênico, ou seja, o gene de interesse é clonado no vetor de expressão e assim é possível se obter a expressão de um insumo biotecnológico como a insulina, por exemplo.

Assinale:

As endonucleases de restrição são proteínas de grande importância dentro da tecnologia do ADN recombinante, sendo fundamentais, por exemplo, na análise da estrutura dos cromossomos, seqüenciamento de longas moléculas de ADN, isolamento de genes e na criação de novas moléculas de ADN que podem ser posteriormente clonadas em distintos tipos de vetores. Em relação ao tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Um pedaço de ADN, produzido pela ação de uma enzima de restrição, também pode ser clivado especificamente em fragmentos menores por ação de outra enzima de restrição.

II. A maioria das enzimas de restrição reconhece sequências de dois a seis pares de bases e hidrolizam uma ligação fosfodiéster na fita de ADN, a exemplo da Pst I que é um palíndromo.

III. As enzimas de restrição são amplamente encontradas em uma grande variedade de procariotos. Sua função básica é reconhecer uma sequência de bases específica na fita simples de ADN em lugares determinados, fazendo cortes no eixo de simetria abruptos ou cortes assimétricos coesivos.

Assinale: