Recomenda-se que o dolutegravir seja administrado seis horas antes ou doze horas depois da tomada de medicamentos contendo cátions polivalentes, como antiácidos com alumínio ou magnésio e polivitamínicos. Suplementos de cálcio ou ferro, quando acompanhados de alimentos, podem ser administrados concomitantemente com dolutegravir.

Para pessoas vivendo com HIV ou AIDS em uso de rifampicina, ácido valpróico, oxcarbazepina, carbamazepina, fenitoína ou fenobarbital, e que não possam substituí-los ou interrompê-los, o dolutegravir poderá ser utilizado na posologia de 50 mg duas vezes ao dia. 

A associação de dolutegravir com dofetilida e pilsicainida é contraindicada. 

O dolutegravir reduz a concentração plasmática da metformina; portanto, a sua administração concomitante requer monitorização rigorosa do tratamento da diabetes mellitus.