Quanto mais enzimas HRP (horseradish) no polímero, mais cromógeno diaminobenzidina
(DAB) é ativado, resultando em uma imunomarcação mais sensível e mais visível.
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Uma grande vantagem dos sistemas poliméricos de detecção é que eles eliminam o problema
da biotina endógena por evitar o anticorpo secundário biotinilado.
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Os sistemas de detecção, com base em polímeros, foram introduzidos há alguns anos, na
prática imuno-histoquímica com o objetivo de simplificação das múltiplas etapas, produzindo
protocolos mais curtos com a vantagem de melhorar a sensibilidade de detecção.
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Atualmente, na prática imuno-histoquímica, o que se pretende não é a simplificação de
múltiplas etapas, produzindo protocolos mais curtos sem comprometer a sensibilidade de
detecção.
O uso do método da fosfatase alcalina como segunda marcação tem a vantagem de evitar a
reatividade cruzada, que pode ocorrer quando dois procedimentos de imunoperoxidase são
utilizados em conjunto.
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De um modo geral, as considerações técnicas para o método peroxidase antiperoxidase
(PAP) não se aplicam ao método da fosfatase alcalina-antifosfatase (APAAP).
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O método da fosfatase alcalina-antifosfatase alcalina (APAAP) tem três aplicações principais,
isto é, serve para marcar tecidos com altos níveis de peroxidase endógena, para dupla
imunomarcação aliada à peroxidase e para imunomarcação de tipos celulares específicos
que se beneficiam da cor vermelha resultante da atividade enzimática sobre o substrato.
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As soluções de tampão fosfato (PBS) ou tampão tris (TBS) podem ser também utilizadas
para recobrir os cortes entre as passagens de um passo para outro.
Quanto menor o tempo de fixação menor a formação de ligações cruzadas e, por isso, é
preferível um menor tempo de fixação para o emprego de métodos imuno-histoquímicos,
razão pela qual a fase pré-analítica é muito importante nesses métodos.
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