Questões da Prova COSEAC - 2015 - UFF - Técnico de Laboratório/Área: Microscopia Eletrônica

O material biológico incluído em resina epóxi, usado para análise ultraestrutural, pode ser guardado durante muito tempo sem prejuízo da amostra. Porém, para que reações imunocitoquímicas, para detecção de antígenos, sejam realizadas neste material, é necessário submetê-lo ao processo denominado desmascaramento de antígenos e sublimação, nas secções ultrafinas. Em relação às soluções abaixo relacionadas, é correto afirmar que todas podem ser usadas neste processo, EXCETO:

Os carboidratos desempenham importante papel nos sistemas biológicos, e podem estar associados a proteínas, formando complexos macromoleculares, com importante papel funcional na célula. Sua visualização, usando-se critérios morfológicos, é bastante restrita, por isso algumas técnicas foram desenvolvidas para permitir sua detecção, do ponto de vista ultraestrutural, de forma mais precisa. Pode-se afirmar que as técnicas que permitem detecção dos carboidratos para análise qualitativa e quantitativa, respectivamente, são:

A citoquímica estrutural permite a localização in situ da atividade enzimática. No entanto, estabelecer protocolos de fixação que permitam a preservação das estruturas celulares e a atividade catalítica é um desafio da técnica. São comuns os falsos resultados, nas reações para detecção da atividade de enzimas glicolíticas. Isto ocorre pelo deslocamento por difusão, em tecidos não fixados, da enzima ou do produto da reação em relação ao seu sítio de atividade. A fim de evitar estes artefatos técnicos, recomenda-se adicionar ao meio de incubação para revelar a enzima a seguinte solução:

Na detecção das desidrogenases pelo método de redução pelos sais tetrazólio, seguem-se as etapas de fixação, lavagem e revelação da ação enzimática. A fixação deve ser branda com aldeído fórmico e glutárico em baixas concentrações, durante poucos minutos, seguida de lavagem longa para retirar resíduos de aldeído livre. A incubação com solução reveladora, contendo tampão fosfato, substrato da enzima, diestiril nitrobluetetrazólio (DS-NBT), e dimetilsulfóxido (DMSO), permitirá revelar a ação enzimática. Todos os experimentos necessitam de controles negativos da reação, e para isto serão usadas as condições de incubação abaixo, EXCETO:

A resina acrílica LRWhite, que, devido a sua natureza hidrofílica, é permeável aos anticorpos utilizados para imunocitoquímica ultraestrutural, pode ser polimerizada sem acréscimo de catalizador, na seguinte condição: