A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica fundamental da biologia molecular, amplamente utilizada na pesquisa científica, no diagnóstico molecular, na medicina forense e no melhoramento genético. Ela permite a amplificação in vitro de sequências específicas de DNA por meio de ciclos repetidos de reações enzimáticas controladas por temperatura. Esse processo é realizado em um equipamento chamado termociclador, que ajusta automaticamente as temperaturas específicas necessárias para cada etapa do ciclo, garantindo a replicação exponencial da sequência-alvo. Com base nessa técnica, enumere, correta e respectivamente, as etapas de um ciclo completo da PCR em um protocolo padrão, considerando suas funções e as temperaturas típicas em que ocorrem conforme apresentado no livro “Introdução à Genética” (Griffiths et al., 2020). 

( ) Aquecimento ~95 °C. ( ) Desnaturação completa da dupla fita de DNA em moldes simples. ( ) Resfriamento da reação para entre ~50–65 °C. ( ) Hibridização dos primers às regiões complementares da fita molde de DNA. ( ) Aquecimento para 72 °C. ( ) Extensão catalisada pela enzima Taq DNA polimerase.

A ordem correta de preenchimento dos parênteses, de cima para baixo, é: