Tema central: comparação entre HPLC e FPLC na separação/análise de proteínas. Em provas, diferencie: HPLC = alta pressão, amplo uso analítico e também preparativo; FPLC = baixa pressão, voltado à purificação de biomoléculas em meio aquoso.

Alternativa INCORRETA (gabarito): A
“HPLC e FPLC são, ambas, técnicas analíticas.” — Incorreta porque FPLC é primordialmente preparativa, otimizada para purificar proteínas/peptídeos mantendo sua atividade (meios aquosos, pressões baixas). Já a HPLC é amplamente empregada em análise quantitativa (bioquímica clínica, fármacos, peptídeos) e também em preparações. Referências: Snyder, Kirkland & Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3ª ed.; Manuais Cytiva/ÄKTA.

Análise das demais alternativas

B) Correta. Em FPLC, a fase estacionária é tipicamente agarose (ex.: Sepharose) para ion-exchange, affinity ou size-exclusion. Em HPLC, usa-se majoritariamente sílica de alta eficiência (C18/C8, partículas pequenas). Isso reflete a necessidade de condições brandas em FPLC vs. alta eficiência em HPLC. (Snyder & Kirkland; Cytiva Handbooks)

C) Correta. É possível empregar fase reversa em sistemas FPLC quando se utilizam colunas e materiais compatíveis (ex.: RESOURCE/Source RPC, Cytiva), especialmente para peptídeos e proteínas hidrofóbicas. Atenção: proteínas grandes podem desnaturar em solventes orgânicos; a aplicação é mais segura para peptídeos/mini-proteínas. (Cytiva ÄKTA System Handbooks)

D) Correta. FPLC usa partículas maiores e colunas mais largas, permitindo maiores vazões volumétricas sob baixa pressão (purificação rápida). Já a HPLC trabalha com altas pressões e vazões tipicamente menores em colunas analíticas (ex.: 0,2–2 mL/min), focando eficiência/placas teóricas. (Snyder & Kirkland)

E) Correta. Colunas de FPLC suportam ~2–4 MPa (20–40 bar). Colunas de HPLC suportam pressões muito maiores (tipicamente 20–60 MPa em HPLC convencional; UHPLC pode exceder 100 MPa). Isso explica a diferença de hardware e materiais entre as técnicas. (Snyder & Kirkland)

Estratégia de prova: busque palavras-chave. “Analítico” remete a quantificação (HPLC); “purificação rápida em meio aquoso” indica FPLC. Note também pistas de pressão (MPa/bar) e fase estacionária (agarose vs sílica).

Aplicação clínica/laboratorial: HPLC é padrão em dosagem de fármacos e peptídeos; FPLC é preferida para purificar proteínas recombinantes/enzimas preservando atividade — rotinas comuns em laboratórios biomédicos e veterinários.

Referências essenciais: Snyder, Kirkland & Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography (3ª ed.); GE Healthcare/Cytiva ÄKTA FPLC System Handbooks; Engelhardt, Practice of HPLC.

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