Tema central: Calibração diária de citômetro de fluxo com microesferas fluorescentes para verificar desempenho óptico-eletrônico do instrumento: sensibilidade/eficiência de detecção, linearidade dos PMTs, ruído eletrônico e sincronização entre lasers (Time Delay). Esse procedimento usa esferas com fluorescência conhecida (ex.: em MESF), padronizando a resposta do equipamento, conforme recomendações CLSI H62 e consensos ICCS/ESCCA.

Alternativa correta (EXCETO): A — “desvio padrão ao quadrado da população de células não marcadas”. A calibração diária não mede a variância (SD²) de células não marcadas, pois: (1) usa-se microesferas padronizadas, não células, para evitar variabilidade biológica; (2) a variância de células não marcadas depende de preparo/amostra, não é um parâmetro estável de instrument performance; (3) as métricas de ruído e fundo são derivadas do baseline eletrônico e de beads de baixa fluorescência, não de populações celulares. Diretrizes de controle de qualidade (CLSI H62; Wood et al., Current Protocols in Cytometry) enfatizam o uso de beads para checagens objetivas do instrumento.

Análise das demais alternativas:

B - Eficiência de detecção de fluorescência relativa: Válida. Corresponde à sensibilidade (parâmetro Q) e ao fundo (B), avaliadas com beads de baixa intensidade. Verifica-se a capacidade de distinguir sinais fracos do ruído, parte essencial do QC diário (ICCS/ESCCA).

C - Linearidade dos PMTs: Válida. Beads multintensidade (picos graduados) permitem checar se a resposta do PMT é proporcional ao sinal ao longo de décadas (escala log/lin). Desvios indicam saturação ou ajustes inadequados de voltagem.

D - Desvio padrão do ruído eletrônico: Válida. O baseline (ruído) é medido com feixe bloqueado ou beads “blank”, estimando o SD do ruído do sistema. Aumentos no SD elevam o limite de detecção e pioram a resolução de populações fracas.

E - Atraso de tempo de acionamento do laser (Time Delay): Válida. Em instrumentos com múltiplos lasers, ajusta-se o time delay para sincronizar os sinais do mesmo evento (beads de alinhamento/roseta). Isso garante sobreposição correta entre canais e compensação adequada.

Estratégia de prova: Diante de “microesferas fluorescentes” e “calibração diária”, pense em parâmetros instrumentais, não biológicos. A menção a “células não marcadas” denuncia a alternativa destoante.

Referências úteis: CLSI H62 (Flow Cytometry Method Validation); ICCS/ESCCA Consensus on Instrument Setup; Wood B. et al., Current Protocols in Cytometry; notas técnicas de fabricantes (BD, Beckman Coulter, Spherotech).

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