Tema central: Sistema de fluidos na citometria de fluxo, responsável por formar o “core stream” (amostra) dentro do sheath (fluido de arraste), garantindo fluxo laminar e alinhamento unifilar das partículas ao atravessar a célula de fluxo/orifício. Esse arranjo assegura leitura individual pela óptica do instrumento.

Alternativa INCORRETA: D. “Bolhas na célula de fluxo nunca causam problemas.” — Falso. Bolhas desestabilizam o core stream, mudam o índice de refração, causam quedas e picos de sinal, aumentam o coeficiente de variação, geram coincidência/aborts, podem provocar desalinhamento do laser e até obstruções. Boas práticas incluem desgaseificar o sheath, filtrar (0,2 μm), purgar o sistema e manutenção da célula de fluxo. Referências: Shapiro, Practical Flow Cytometry; UpToDate (Flow cytometry: Instrumentation); ISAC Best Practices.

Análise das demais alternativas:

A. Verdadeira. No foco hidrodinâmico, a amostra é aspirada e confinada pelo sheath ao passar por um orifício na célula de fluxo, formando um jato central com Reynolds baixo (fluxo laminar) que direciona as partículas. Base: Shapiro; UpToDate.

B. Verdadeira. O alinhamento unifilar é exatamente a finalidade do foco hidrodinâmico, permitindo que o feixe de laser atinja uma célula por vez e possibilite medidas de FSC/SSC e fluorescências sem sobreposição. Base: ISAC, Ormerod.

C. Verdadeira (recomendação operacional). Manter a mesma velocidade de fluxo padroniza o tempo de permanência no feixe e reduz coincidências. Usar o mesmo volume/aliquota e preparação homogênea favorece comparabilidade entre amostras, especialmente quando não se faz contagem absoluta por beads ou volumetria certificada. Diretriz prática: padronização de aquisição (ISAC/MIFlowCyt).

E. Verdadeira. À medida que a taxa de eventos sobe, cresce a taxa de abortos por coincidência/limitações de processamento, com risco de perda de eventos raros. Por isso recomenda-se fluxo baixo–médio para populações raras. Base: UpToDate; Shapiro.

Estratégia de prova: Palavras absolutas como “nunca” são fortes indícios de erro. Em citometria, qualquer fator que perturbe o fluxo laminar (p.ex., bolhas) tende a afetar a aquisição.

Aplicação prática e conservação do equipamento: Use sheath novo e filtrado, execute prime/purga para remover bolhas, faça limpeza diária da célula de fluxo, mantenha consistência de fluxo e monitore taxa de eventos/aborts no software.

Referências: Shapiro H. Practical Flow Cytometry; Ormerod MG. Flow Cytometry: A Practical Approach; UpToDate: Flow cytometry instrumentation; ISAC/MIFlowCyt reporting and best practices.

Gabarito: D

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