A calibração de um espectrofotômetro é um processo utilizado para confirmar que o aparelho está funcionando corretamente: 1 - Primeiramente deve-se ajustar o 100% T (transmitância) do aparelho com a , contendo somente o solvente (normalmente água). 2 - Logo após, deve-se ajustar o 0% T com o feixe de luz totalmente obstruído por um padrão preto.

O espectrofotômetro é um instrumento, que permite, comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução, que contém uma quantidade desconhecida de soluto e uma solução que contém uma quantidade conhecida da mesma substância.

Um espectro ultravioleta-visível é essencialmente um gráfico da absorbância versus o comprimento de onda na faixa do ultravioleta e/ou visível para uma determinada solução. Através desse gráfico, escolhe-se o comprimento de onda (λ) de leitura que será aquele com menor intensidade para garantir a leitura de amostras concentradas.

Curva de calibração é uma equação que correlaciona a absorbância em determinado comprimento de onda (λ) com a concentração de uma certa substância.

Transmitância é a fração da luz incidente, com comprimento de onda específico, que passa por uma amostra. A amostra absorve uma determinada quantidade de luz e transmite o restante.