Tema central: Imunofenotipagem é a identificação de marcadores de superfície e intracelulares (ex.: CD3, CD19, CD34) em células sanguíneas por anticorpos fluorocromados, permitindo caracterizar populações celulares quanto a tamanho, granulosidade e expressão antigênica. A técnica que faz isso usando laser para excitar fluorocromos é a citometria de fluxo.

Alternativa correta: E – Citometria de fluxo
Usa um sistema fluidodinâmico que alinha células em fila, um ou mais lasers que geram FSC (tamanho) e SSC (complexidade/granulosidade), e detectores de fluorescência para os anticorpos marcados. Permite análise multiparamétrica e gating de subpopulações (ex.: linfócitos CD3/CD4/CD8, blasts CD34). É padrão-ouro para leucemias/linfomas, PNH, monitorização imunológica e HIV. Referências: Harrison’s Principles of Internal Medicine, UpToDate (“Flow cytometry: Principles and clinical applications”), diretrizes da OMS para classificações hematolinfoides.

Por que as demais estão incorretas?

A – Espectrofotometria de absorção atômica: quantifica metais traço em solução após atomização; não analisa células nem usa anticorpos/fluorescência. Fonte típica é lâmpada de cátodo oco, não laser para imunofenotipagem.

B – Nefelometria: mede espalhamento de luz para quantificar proteínas solúveis (ex.: imunoglobulinas, complemento) em soro. Não distingue célula a célula nem avalia marcadores de superfície. Pode usar luz, mas não o sistema de laser + eventos celulares da citometria.

C – Eletroquimioluminescência: plataforma de imunoensaios para hormônios e marcadores séricos; a emissão luminosa é induzida por potencial elétrico, não por laser, e não há análise de populações celulares.

D – Cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC): separa moléculas (fármacos, metabólitos) por fase estacionária/móvel; não caracteriza células nem marcadores de superfície.

Dica de prova: identifique as palavras-chave “população de células” + “características físicas e biológicas” + “laser”. Essa tríade aponta para citometria de fluxo. Evite a armadilha de confundir com nefelometria (espalhamento por proteínas em solução) ou imunoensaios (quantificação de analitos, não células).

Aplicação prática: em suspeita de LLA, citometria detecta blasts CD34+ e define linhagem (CD19+ B ou CD3+ T). Em HIV, quantifica CD4+ para seguimento terapêutico.

Gabarito: E – Citometria de fluxo.

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