Tema central: Fotometria em bioquímica clínica baseia-se na medição da absorvância de luz por soluções para quantificar analitos (ex.: glicose, ureia, enzimas). O princípio-chave é a Lei de Beer-Lambert, essencial para a exatidão de resultados laboratoriais.

Alternativa correta: C — A Lei de Beer-Lambert estabelece que A = ε · b · c, onde A é a absorbância, ε o coeficiente de absortividade molar, b o caminho óptico e c a concentração. Assim, absorbância é diretamente proporcional à concentração, desde que sejam mantidas condições ideais: luz praticamente monocromática, caminho óptico constante (cubeta padronizada), ausência de interferentes e faixa linear do método. Essa relação fundamenta o uso de curvas de calibração e controles internos. Referências: Tietz Textbook of Clinical Chemistry; Henry’s Clinical Diagnosis; CLSI EP07 (interferências) e EP06 (linearidade).

Análise das alternativas incorretas

A — Incorreta. O caminho óptico (b) entra diretamente na equação de Beer-Lambert. Cubetas com espessuras diferentes alteram a absorbância e, portanto, o resultado. Por isso se usam cubetas de 1 cm ou correção de caminho óptico em microcubetas.

B — Incorreta. Turbidez, hemólise e lipemia causam dispersão e absorção adicionais da luz, elevando falsamente a absorbância (ou alterando-a). Hemoglobina absorve em ~415/540/576 nm; bilirrubina e triglicérides também interferem. Métodos devem prever correção/remoção de interferentes. (CLSI EP07).

D — Incorreta. O branco de reagente serve para subtrair a absorbância do reagente, solvente e cubeta (ajuste de linha de base), não para “padronizar concentração” nem “eliminar variações do tempo de incubação”. Controle do tempo é feito pelo protocolo de reação e cronometração; padronização de concentração é via calibradores e controles internos.

E — Incorreta. O comprimento de onda é definido por filtros/monocromador e é escolhido para o λ de máxima absorção do cromóforo, aumentando sensibilidade e especificidade (ex.: NADH a 340 nm; glicose GOD-POD a ~505 nm). A intensidade da lâmpada afeta o SNR, mas não determina o λ nem a especificidade analítica.

Estratégias para a prova

- Identifique palavras-chave: Beer-Lambert, caminho óptico, interferentes (hemólise/lipemia/turbidez), branco de reagente e comprimento de onda.

- Desconfie de afirmações absolutas: “não interfere”, “unicamente”, “não influencia”. Em fotometria, pequenos detalhes (cubeta, λ, interferentes) mudam o resultado.

- Pense na prática: sempre padronize cubeta (1 cm), use branco, selecione λ do cromóforo e verifique interferências antes da leitura.

Referências: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics; Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods; CLSI EP06 (Linearidade) e EP07 (Interferência); ISO 15189 (qualidade laboratorial).

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