Tema central: Tecnologias de sequenciamento de nova geração (NGS) permitem o sequenciamento massivo e paralelo de DNA, fundamentais em diagnóstico humano: oncogenética (painéis de genes), doenças raras (exoma/genoma), e infectologia (vigilância genômica, resistência antimicrobiana).

Alternativa INCORRETA: E – “não são empregadas para o sequenciamento de amplicon”. Isso é falso. O sequenciamento de amplicon é uma aplicação clássica do NGS: regiões-alvo são amplificadas por PCR e depois sequenciadas em alto rendimento. Exemplos: 16S rRNA para microbiota, painéis oncológicos por PCR multiplex, vigilância de vírus (p. ex., ARTIC para SARS‑CoV‑2). Diretrizes e revisões confirmam seu uso amplo (UpToDate; Mardis, Nature Rev Genet 2017; WHO/PAHO guias para vigilância genômica por amplicon).

Análise das demais alternativas:

A. Verdadeira. NGS realiza sequenciamento direto e paralelo de milhões a bilhões de moléculas, gerando altíssima profundidade e cobertura (ex.: plataformas Illumina/NovaSeq). Isso reduz custo por base e aumenta a detecção de variantes raras. (UpToDate; Mardis).

B. Verdadeira. É apropriado para genoma completo (WGS), usado clinicamente para variantes estruturais, CNVs e SNVs com cobertura típica ≥30x em humanos (Harrison’s; ACMG/AMP – padrões técnicos).

C. Verdadeira. NGS é fundamental em metagenômica (shotgun e 16S/ITS), permitindo identificar patógenos sem cultura, mapear resistoma e perfilar microbiomas diretamente de amostras clínicas. (UpToDate; Nature Reviews).

D. Verdadeira. Bibliotecas enriquecidas com fragmentos-alvo são rotineiras: hybrid capture (exoma, painéis de genes) e amplicon-based (PCR multiplex). Muito usadas em oncologia (BRCA1/2, EGFR) e doenças monogênicas. (ACMG/AMP; Illumina tech notes).

Estratégia de prova: Atenção a negativas absolutas como “não são empregadas”. Reconheça termos-chave: amplicon = PCR seguido de NGS; metagenômica = DNA total de amostras; enriquecimento = captura/seleção de alvos.

Aplicação clínica: NGS de amplicon e painéis alvo são padrão em diagnóstico oncológico e em vigilância de patógenos (ex.: SARS‑CoV‑2), alinhado a guias da OMS/OPAS e recomendações ACMG para validação de testes.

Referências essenciais: UpToDate – “Next-generation DNA sequencing”; Mardis ER. Nat Rev Genet 2017; OMS/OPAS – guias de sequenciamento genômico para vigilância; ACMG/AMP – padrões técnicos para NGS.

Gabarito: E

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