Tema central: a questão aborda fluoróforos que se ligam ao DNA e emitem fluorescência quando excitados, úteis para quantificação de conteúdo de DNA (ex.: análise de ciclo celular) e avaliação de viabilidade celular em citometria de fluxo e microscopia.

Alternativa correta: D — Iodeto de Propídio (PI)
O iodeto de propídio é um intercalante de ácidos nucleicos que se liga preferencialmente ao DNA de dupla hélice e, ao ser excitado (≈488 nm), emite fluorescência vermelha (~617 nm). É amplamente usado para medir conteúdo de DNA e distinguir células viáveis de não viáveis (não atravessa membranas íntegras). Em protocolos de ciclo celular, associa-se a RNase para remover RNA e evitar superestimação do sinal. Referências clássicas: Shapiro – Practical Flow Cytometry; Molecular Probes Handbook; UpToDate (tópicos de citometria de fluxo).

Estratégia para a prova: procure palavras-chave como “fluoróforo que se liga ao DNA”. Lembre de exemplos típicos: PI, DAPI, Hoechst, 7-AAD. Descarte buffers, enzimas e reagentes de suporte que não são marcadores de DNA.

Por que as demais alternativas estão incorretas?

A) RNase: é uma enzima que degrada RNA. Serve para tornar a marcação com PI específica para DNA, mas não é um fluoróforo e não fluoresce ao ligar-se ao DNA.

B) Anexina (Anexina V): proteína que se liga à fosfatidilserina exposta na membrana durante apoptose. Usada para detecção de apoptose, frequentemente combinada a PI, porém não marca DNA.

C) PBS (Phosphate Buffered Saline): é um tampão salino para lavar e suspender células. Não possui fluorescência nem se liga ao DNA.

D) Iodeto de propídio: Correta. Fluoróforo intercalante do DNA, padrão ouro para conteúdo de DNA e viabilidade.

E) IsoFlow: fluido de sheath usado em citometria de fluxo (ex.: Beckman Coulter) para focagem hidrodinâmica. Não é corante de DNA.

Dica prática: quando a pergunta citar “conteúdo de DNA”, pense em intercalantes (PI, 7-AAD) ou ligantes de sulco menor (DAPI/Hoechst). Se a opção for enzima, tampão ou fluido de sheath, é uma pegadinha.

Referências úteis: Shapiro HM. Practical Flow Cytometry; Molecular Probes Handbook (Thermo Fisher); UpToDate – Principles of flow cytometry.

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