Alternativa correta: C - TEV

1. Tema central da questão

Esta questão aborda o uso de "tags" em biotecnologia molecular, especialmente no contexto da expressão e purificação de proteínas recombinantes. O ponto-chave é reconhecer a função das enzimas de clivagem utilizadas para remover essas tags após a expressão da proteína de interesse.

2. Resumo teórico: O que são "tags" e qual o papel da clivagem enzimática?

No processo de produção de proteínas recombinantes, frequentemente se adicionam "tags" (peptídeos ou proteínas curtas) para facilitar a identificação, purificação, solubilidade ou expressão dessas proteínas em sistemas heterólogos (ex: bactérias, leveduras). Exemplos comuns de tags incluem His-tag, GST, MBP e FLAG.

Após a produção e purificação, muitas vezes é necessário remover a tag para que a proteína tenha funcionalidade nativa, livre de resíduos adicionais. Enzimas de clivagem específicas, como a protease TEV, são utilizadas para esse fim porque reconhecem sequências específicas e cortam precisamente no local desejado.

Fonte: Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual.

3. Justificativa da alternativa correta (C - TEV)

A protease TEV (Tobacco Etch Virus protease) é uma enzima altamente específica usada mundialmente para remover tags de proteínas recombinantes. Ela reconhece uma sequência consenso bem definida (ENLYFQ↓G) e faz a clivagem de forma precisa, separando a tag da proteína de interesse sem degradar o restante da molécula. Por sua eficiência e especificidade, tornou-se padrão em laboratórios de biologia molecular.

4. Análise das alternativas incorretas

• A - FLAG: Errada. FLAG é uma tag peptídica, não uma enzima de clivagem. Seu objetivo é facilitar a detecção e purificação.
• B - MBP: Errada. MBP (Maltose-Binding Protein) é também uma tag de fusão usada para melhorar a solubilidade e purificação, não uma enzima.
• D - GST: Errada. GST (Glutathione S-Transferase) é uma tag protéica muito usada para purificação por afinidade, mas não é uma enzima de clivagem.
• E - GFP: Errada. GFP (Green Fluorescent Protein) serve como tag fluorescente para rastreamento de expressão, mas não tem função enzimática de clivagem.

5. Estratégias para resolver questões desse tipo

Dica 1: Sempre identifique no enunciado se a questão pede uma enzima (função catalítica) ou uma tag (marcação, purificação, solubilidade).
Dica 2: Palavras-chave como "remoção", "clivagem enzimática" ou "protease" remetem à função de cortar/retirar segmentos específicos.
Dica 3: Cuidado com pegadinhas! Muitas tags são nomeadas de forma similar a enzimas, mas sua função é diferente.

Gostou do comentário? Deixe sua avaliação aqui embaixo!