A questão em análise aborda as metodologias de citometria de fluxo, uma técnica amplamente utilizada na identificação e quantificação de proteínas em células. Vamos explorar cada alternativa para identificar a incorreta e entender por que as outras estão corretas.

A - A atividade enzimática de proteínas intracelulares pode ser avaliada por citometria de fluxo incubando as células com substratos cromogênicos ou fluorogênicos.

Esta alternativa está correta. A citometria de fluxo pode, de fato, ser usada para avaliar a atividade enzimática, utilizando substratos que emitem sinal fluorescente ou cromogênico quando processados por enzimas intracelulares. Isso permite a análise de atividade enzimática em células vivas.

B - O conteúdo total de proteínas celulares pode ser avaliado por citometria de fluxo utilizando corantes protéicos como FITC e hematoporfirina (HP) sem a necessidade da adição de anticorpos específicos.

Esta afirmação é verdadeira. Corantes como FITC podem ser utilizados para marcar proteínas, permitindo sua quantificação geral sem a necessidade de anticorpos, uma vez que os corantes se ligam diretamente às proteínas.

C - Genes repórteres como GFP (green fluorescent protein) podem ser utilizados para estudar expressão gênica ou modelos celulares de infecção por diferentes patógenos.

Correta. O uso de genes repórteres como GFP é uma técnica comum para estudar a expressão gênica e a resposta celular a infecções. A GFP é expressa em células que ativaram o gene de interesse, permitindo seu rastreamento por fluorescência.

D - Nos experimentos, devem ser utilizados controles negativos com células que não expressam as proteínas investigadas ou mesmo anticorpos inespecíficos conjugados com a fluorescência em questão.

Essa alternativa é correta. O uso de controles negativos é essencial para diferenciar o sinal específico do ruído de fundo, garantindo a validade dos resultados da citometria de fluxo.

E - Os anticorpos monoclonais, utilizados na citometria de fluxo para identificar antígenos ou proteínas são produzidos com de soro total de animais imunizados com os antígenos ou proteínas de interesse.

Esta é a alternativa incorreta. Anticorpos monoclonais são produzidos por técnicas de hibridoma, onde células B de animais imunizados são fundidas com células tumorais para produzir anticorpos específicos, e não a partir de soro total. O soro total contém anticorpos policlonais, que não possuem a especificidade dos monoclonais.

Portanto, a alternativa E é a incorreta, já que descreve erroneamente a produção de anticorpos monoclonais.

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