Alternativa correta: E - brancas (β-gal inativa) que apresentam o inserto.

1. Tema central da questão

Esta questão aborda o processo de seleção de clones recombinantes em experimentos de clonagem gênica, utilizando plasmídeos da série pUC e o sistema de identificação baseado no gene lacZ. Este é um dos métodos mais clássicos e cobrados em concursos de Biologia Molecular, Biotecnologia e áreas afins.

2. Resumo teórico

Plasmídeos como os da série pUC são vetores usados para inserir fragmentos de DNA em bactérias. Eles possuem o gene lacZ, que codifica a enzima β-galactosidase. Essa enzima pode quebrar o substrato sintético X-Gal, produzindo um pigmento azul nas colônias bacterianas.

Quando um DNA exógeno (inserto) é inserido no sítio específico dentro do gene lacZ, a função desse gene é interrompida. Isso faz com que a β-galactosidase não seja produzida (atividade inativa), e a colônia bacteriana não fique azul, mas branca. Portanto, colônias brancas indicam a presença do inserto, enquanto colônias azuis indicam que o plasmídeo não carrega o inserto (gene lacZ íntegro).

Referência: Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001.

3. Justificativa da alternativa correta

A alternativa E está correta porque:

• Colônias brancas: resultam da inativação da β-galactosidase devido à interrupção do gene lacZ pela inserção do DNA estranho.
• Apresentam o inserto: a cor branca indica que o plasmídeo recebeu e incorporou o fragmento de DNA exógeno com sucesso.

Ou seja, quando procuramos clones recombinantes, escolhemos as colônias brancas, pois nelas a β-galactosidase está inativa e o inserto está presente.

4. Análise das alternativas incorretas

A - azuis (β-gal inativa) que apresentam o inserto.
Errada. Colônias azuis possuem β-galactosidase ativa, e geralmente não apresentam o inserto, pois o gene lacZ está íntegro.

B - brancas (β-gal ativa) que apresentam o inserto.
Errada. Colônias brancas têm a enzima inativa, não ativa. A inativação ocorre justamente pela presença do inserto.

C - azuis (β-gal inativa) que não apresentam o inserto.
Errada. Colônias azuis possuem β-galactosidase ativa, e não inativa. Se não apresentam o inserto, o gene lacZ está funcional.

D - brancas (β-gal ativa) que não apresentam o inserto.
Errada. Novamente, colônias brancas indicam inativação da enzima, e a ausência do inserto mantém a enzima ativa.

5. Estratégias de interpretação

Para resolver este tipo de questão, atente-se aos seguintes pontos:

• Associe a cor ao estado do gene: Azul = lacZ ativo (sem inserto); Branco = lacZ inativo (com inserto).
• Leia cuidadosamente as duas informações de cada alternativa: cor da colônia e presença/ausência do inserto.
• Evite confusões comuns: Muitas questões trocam “ativo” por “inativo” ou “presente” por “ausente” para confundir.

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