Tema central: a PCR é um método de amplificação de DNA em três fases cíclicas: desnaturação (separar as fitas), anelamento (ligação dos primers) e extensão (síntese pela DNA-polimerase termoestável). A repetição desses ciclos leva à amplificação exponencial, base de inúmeros diagnósticos (viroses, tuberculose, neoplasias).

Estratégia para resolver: procure no enunciado: 1) aquecimento alto (≈90–95 °C) = desnaturação; 2) resfriamento com ligação de oligonucleotídeos = anelamento; 3) DNA-polimerase resistente ao calor + dNTPs = extensão (≈72 °C); 4) menções a “repetição do processo” e “muitas cópias” = consequência final (amplificação exponencial). Há uma “pegadinha”: o enunciado traz duas frases sobre repetição/resultado; elas vão ao fim, após o ciclo básico.

Alternativa correta: C — Na numeração do enunciado da prova, a sequência que reflete o fluxo lógico é: Desnaturação → Anelamento → Extensão → Repetição do ciclo (duplicação a cada rodada) → Muitas cópias em curto tempo. Esse encadeamento corresponde à alternativa C (2–4–1–5–3) na forma como os itens foram numerados na questão.

Por que está certa? A PCR sempre começa separando as fitas (calor), segue com o pareamento específico de primers quando resfria, depois a Taq (ou outra polimerase termoestável) estende usando dNTPs. Ao repetir o ciclo, a quantidade duplica e, por iterações, atinge-se grande número de cópias em pouco tempo. Referências: UpToDate (Polymerase chain reaction in the clinical microbiology laboratory), Harrison’s Principles of Internal Medicine.

Análise das incorretas:

A (3–1–2–4–5): coloca a extensão por último, como se a polimerase só atuasse depois do “resultado final”. Isso inverte a etapa crucial de síntese.

B (3–1–5–4–2): aproxima a sequência técnica, mas troca a ordem lógica das duas frases finais: primeiro ocorre a duplicação por ciclo, e o efeito “muitas cópias” vem como consequência cumulativa.

D (5–3–2–1–4): inicia com extensão antes da desnaturação, o que é inviável; a polimerase não consegue sintetizar sem separar as fitas e sem primers previamente pareados.

E (2–3–5–1–4): começa pela “repetição” sem ter completado um ciclo; além disso, posiciona o anelamento após a extensão, rompendo a ordem técnica.

Dica prática de prova: associe palavras-chave a temperaturas: 90–95 °C = desnaturação; resfriar = anelamento (primers); 72 °C + dNTPs + polimerase termoestável = extensão. Depois, pense em repetição e amplificação exponencial.

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