Podem ser consideradas como características metodológicas e...
I. a técnica cell sorting é descrita por um processo de identificação e seleção celular em que as células podem ser purificadas de acordo comas diferentes características, tanto a morfologia, e também com base em marcadores.
II. na técnica cell sorting, o princípio base é a deflexão eletrostática de gotículas carregadas, que podem conter células de interesse.
III. na técnica cell sorting, as gotículas carregadas positivamente são desviadas em direção de uma placa de platina de carga negativa, enquanto as gotículas carregadas negativamente são inertes, o que permite a sua coleta em recipientes específicos.
IV. na técnica cell sorting, a deflexão possibilita que células injetadas percorram através de um ponto especifico. A técnica gera a formação de fluxo de gotículas regulares que passam através de um ou mais feixes de laser e que são carregados por um eletrodo de carregamento.
Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que:
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Tema central: Cell sorting (especialmente FACS) é a separação de células individuais com base em propriedades ópticas (morfologia por FSC/SSC) e/ou marcadores fluorescentes (anticorpos conjugados a fluorocromos), após passagem por feixes de laser e aplicação de deflexão eletrostática em gotículas carregadas.
Alternativa correta: B — apenas I, II, IV.
I. Verdadeira. Na citometria de fluxo com sorting, as células são identificadas por morfologia (FSC/SSC) e por marcadores específicos (imunofenótipo fluorescente), sendo então purificadas conforme os “gates” definidos. Isso é padrão em FACS para isolar subpopulações (ex.: linfócitos CD4+, células-tronco CD34+).
II. Verdadeira. O princípio do sorting por gotículas é a deflexão eletrostática de gotículas carregadas: após a célula ser analisada, o jato é quebrado em gotículas regulares; quando uma gota contém uma célula-alvo, um eletrodo de carregamento aplica carga (positiva ou negativa). Placas de deflexão desviam essas gotículas para coletores distintos.
IV. Verdadeira. O sistema utiliza focalização hidrodinâmica para levar a célula a um ponto de interrogação (feixes de laser), gera um fluxo de gotículas regulares e, por meio de um eletrodo de carga, marca as gotículas a serem desviadas. Esse encadeamento descreve corretamente a metodologia FACS.
III. Falsa. Gotículas negativas não são inertes; elas também são defletidas (para o lado oposto às positivas). Em geral, gotas não carregadas vão para o descarte. Além disso, a menção a “placa de platina” é imprecisa; o sistema usa placas de deflexão com polaridades opostas, não importando um metal específico.
Por que as outras alternativas estão erradas?
- A: inclui III (falsa) e ainda exclui II (verdadeira).
- C: inclui III (falsa).
- D: inclui III (falsa).
- E: inclui III (falsa) e exclui I (verdadeira).
Estratégia de prova: destaque palavras-chave como deflexão eletrostática, gotículas carregadas, FSC/SSC e marcadores fluorescentes. Lembre: positivo e negativo desviam; não carregado vai ao lixo. Itens que afirmam “negativas são inertes” são pegadinha clássica.
Referências rápidas: Shapiro HM. Practical Flow Cytometry (Wiley); Herzenberg LA et al., Nat Immunol 2002 (histórico do FACS); Current Protocols in Cytometry; manuais BD FACSAria/SONY SH800.
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