Ao analisar um fármaco em formulação sólida utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE/
HPLC) acoplada a um detector espectrofotométrico UV-
-Vis, observou durante o desenvolvimento do método
analítico, que o fármaco apresenta máximo de absorção
em 254nm e boa separação cromatográfica em coluna de
fase reversa (C18).
Considerando os princípios dos métodos cromatográficos e espectrométricos, bem como os parâmetros de
validação analítica, é correto afirmar que:

Question

Ao analisar um fármaco em formulação sólida utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE/
HPLC) acoplada a um detector espectrofotométrico UV-
-Vis, observou durante o desenvolvimento do método
analítico, que o fármaco apresenta máximo de absorção
em 254nm e boa separação cromatográfica em coluna de
fase reversa (C18).
Considerando os princípios dos métodos cromatográficos e espectrométricos, bem como os parâmetros de
validação analítica, é correto afirmar que: Alternativa A: A seletividade do método é determinada exclusivamente pela escolha do comprimento de onda no
detector UV-Vis, sendo independente das condições cromatográficas. Ou Alternativa B: A utilização de coluna C18 em fase reversa implica
que a fase móvel seja menos polar que a fase estacionária, favorecendo a retenção de compostos polares. Ou Alternativa C: A combinação entre separação cromatográfica e
detecção espectrofotométrica aumenta a especificidade do método, permitindo a quantificação do
analito mesmo na presença de interferentes com
absorção semelhante. Ou Alternativa D: Métodos espectrométricos, como o UV-Vis, são sempre mais seletivos que métodos cromatográficos, tornando desnecessária a etapa de separação prévia.

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [C] A combinação entre separação cromatográfica e
detecção espectrofotométrica aumenta a especificidade do método, permitindo a quantificação do
analito mesmo na presença de interferentes com
absorção semelhante. Gabarito: CFundamento decisivo: Em HPLC em fase reversa, a coluna C18 e a detecção em 254 nm não atuam de forma isolada: a correção do método depende de boa resolução cromatográfica para evitar coeluição, enquanto o detector UV-Vis monitora o analito no seu máximo de absorção. Esse conjunto é o que sustenta a seletividade/especificidade do método e favorece a alternativa C.Tema central: HPLC-UV e seletividadeAnálise das alternativasAErradaErrada porque confunde seletividade do detector com seletividade do método analítico completo. O comprimento de onda influencia a resposta UV do analito, mas a seletividade/especificidade em HPLC também depende das condições cromatográficas, como tipo de coluna, composição da fase móvel, pH, fluxo e resolução entre picos. Portanto, não é independente da cromatografia.BErradaErrada por inverter o princípio da fase reversa. Em coluna C18, a fase estacionária é apolar/hidrofóbica e a fase móvel é relativamente mais polar. Nessas condições, a retenção tende a ser maior para compostos menos polares, e não para compostos polares.CCertaA alternativa C está correta porque a separação cromatográfica reduz a coeluição e a detecção em 254 nm acompanha o analito no comprimento de onda apropriado. Assim, o método consegue quantificar o fármaco com maior confiabilidade em mistura complexa, mesmo diante de interferentes que possam absorver de forma semelhante, desde que haja resolução cromatográfica adequada.DErradaErrada porque UV-Vis isolado não é sempre mais seletivo que cromatografia. Substâncias diferentes podem absorver em faixas semelhantes, inclusive em 254 nm, e isso gera sobreposição espectral e interferência. Em matrizes complexas, a separação cromatográfica prévia é justamente o que aumenta a capacidade de distinguir e quantificar corretamente o analito.Pegadinha da questãoA banca explora duas confusões clássicas: tratar o λmáx como se garantisse sozinho a seletividade do método e inverter a lógica da fase reversa, atribuindo à coluna C18 retenção de compostos polares.Dica para questões semelhantesEm HPLC-UV, avalie sempre o método como conjunto: separação cromatográfica adequada mais detecção no comprimento de onda apropriado.Em fase reversa com C18, lembre que a fase estacionária é apolar e a retenção tende a ser maior para analitos mais hidrofóbicos.λmáx melhora a sensibilidade da detecção, mas não elimina por si só interferentes que também absorvam na mesma faixa.Se houver boa resolução cromatográfica, interferentes com absorbância semelhante ainda podem ser diferenciados pelo tempo de retenção.

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Ao analisar um fármaco em formulação sólida utilizando croma...

Gabarito comentado

Gabarito: C

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