A coloração de Gram é uma técnica diferencial clássica da microbiologia que permite distinguir bactérias observadas em microscopia óptica com base nas diferenças estruturais encontradas nos diferentes microrganismos. O protocolo consiste em uma série de etapas após a fixação do esfregaço na lâmina, cada uma delas seguida por enxágues com água destilada, conforme indicado a seguir:

1. coloração com cristal-violeta por aproximadamente 1 min;

2. coloração com solução de lugol (iodo) por aproximadamente 1 min;

3. lavagem com solventes orgânicos (etanol 95% ou etanol-acetona) por 10 a 20 s;

4. coloração com solução de safranina (ou fucsina) por 30 a 60 s.

Durante a realização desse protocolo com um material que sabidamente continha uma mistura de bactérias Gram-negativas e Gram-positivas, um técnico de laboratório deixou as lâminas que já haviam sido coradas com cristal-violeta e lugol, durante um tempo excessivo, mergulhadas na solução de etanol 95%, fazendo com que a etapa 3 do protocolo durasse cerca de 1 min. Entretanto, para não desperdiçar o material e o tempo de trabalho já realizado, decidiu continuar com a última etapa de coloração. Após o término das etapas do protocolo e secagem das lâminas, o técnico, ao observá-las no microscópio óptico, pode perceber que