O princípio da substituição estabelece que um determinado objetivo de uma pesquisa seja alcançado sem o uso de animais dos filos dos artrópodes e cordados.

Em fevereiro de 2023, o CONCEA publicou a Resolução Normativa nº. 58, a qual torna obrigatório o uso de métodos alternativos reconhecidos por este Conselho em pesquisa científica, no desenvolvimento e no controle da qualidade de produtos de higiene pessoal, cosméticos ou perfumes que utilizem em suas formulações ingredientes ou compostos cuja segurança ou eficácia não tenham sido comprovadas.

O princípio dos 3Rs foi difundido pela primeira vez em 1946 por meio de um fundo chamado Frame (Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments), o qual foi criado diante da grande demanda por trabalhos científicos após a segunda guerra mundial. 

De modo a seguir correta e plenamente o princípio da redução, os pesquisadores que conduzem experimentos deverão utilizar apenas sistemas orgânicos ex-vivo.

O princípio do refinamento é alcançado completamente quando não há possibilidade de dor ou desconforto ao animal durante a condução do experimento.