Tema central: Sequenciamento genômico de produtos amplificados para identificação/monitoramento de vírus emergentes. Em Microbiologia, técnicas de Next-Generation Sequencing (NGS) permitem ler a sequência de nucleotídeos de genomas virais, crucial para diagnóstico, vigilância e detecção de variantes (OMS/WHO Genomic Sequencing for Public Health, 2022; CDC Genomic Surveillance; UpToDate – Molecular diagnostics of infectious diseases).

Alternativa correta: E – Illumina; Pirosequenciamento; SOLiD.

Por que está correta?

• Illumina (sequenciamento por síntese): incorpora nucleotídeos com terminadores reversíveis e lê sinais de fluorescência a cada ciclo. É o método NGS mais difundido para genomas virais (alta acurácia).
• Pirosequenciamento: também “por síntese”, detecta pirofosfato liberado em cada incorporação (tecnologia 454). É sequenciamento, ainda que menos usado hoje.
• SOLiD: sequenciamento por ligação com oligonucleotídeos marcados (color-space), reconhecido como plataforma NGS.

Estratégia para a prova: identifique termos que denotam sequenciamento (“por síntese”, “por ligação”) e descarte técnicas de amplificação (RCA, SISPA) ou de hibridização/tipagem (microarray, RFLP). Se uma alternativa mistura um método de sequenciamento com um de amplificação, ela não atende ao enunciado.

Análise das incorretas

• A: Illumina e SOLiD são de sequenciamento, mas RCA (Rolling Circle Amplification) é amplificação isotérmica, não lê bases. Mistura métodos de naturezas distintas.
• B: SOLiD é sequenciamento, porém SISPA é amplificação independente de sequência e RFLP é análise de polimorfismo por restrição (tipagem/hibridização), não sequencia.
• C: DNA microarray é hibridização (detecção/expressão), não sequencia. Pirosequenciamento e SOLiD são válidos, mas a presença do microarray invalida a alternativa.
• D: Traz Pirosequenciamento e SOLiD (sequenciamento), porém inclui RCA (amplificação), logo não atende ao pedido.

Pegadinhas comuns: - Termos com “amplification” (RCA, SISPA) ≠ sequenciar. - “Microarray” sugere leitura genômica, mas é hibridização, não leitura de bases. - “RFLP” analisa padrões de fragmentos, não a sequência completa.

Aplicação prática: Em vigilância de SARS-CoV-2, Influenza e outros vírus emergentes, Illumina e SOLiD permitem montar genomas e rastrear mutações e linhagens (CDC; OMS; Murray – Medical Microbiology; ASM Clinical Microbiology).

Gabarito: E

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