O PCR convencional é uma técnica de alta sensibilidade
sujeita à contaminação. Para prevenir a contaminação da
reação de PCR é indicado:

Question

O PCR convencional é uma técnica de alta sensibilidade
sujeita à contaminação. Para prevenir a contaminação da
reação de PCR é indicado: Alternativa A: utilizar ponteiras com filtros para bloquear a produção
de aerossol e a irradiação UV de materiais plásticos e
componentes de reação (incluindo Taq polimerase e
iniciadores ou primers). Ou Alternativa B: transportar a amostra em meio de transporte viral ou
solução salina estéril tamponada com fosfato e limpar
frequentemente equipamentos e superfícies de laboratório com água sanitária a 10%. Ou Alternativa C: incluir uracil-Nglicosilase na mistura de reação e reduzir
a concentração dos iniciadores (primers) específicos e
de cloreto de magnésio (MgCl2) na mistura da reação. Ou Alternativa D: incorporar mais de um conjunto de iniciadores (primers)
à mistura de reação, permitindo a detecção de múltiplas
regiões de um mesmo alvo. Ou Alternativa E: separar fisicamente o laboratório em seções onde (I) a
amostra é preparada, (II) a reação de PCR é preparada,
(III) ocorre a reação de amplificação por PCR e (IV) os
produtos de amplificação são detectados

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [E] separar fisicamente o laboratório em seções onde (I) a
amostra é preparada, (II) a reação de PCR é preparada,
(III) ocorre a reação de amplificação por PCR e (IV) os
produtos de amplificação são detectados  Gabarito: EFundamento decisivo: No PCR convencional, o principal risco de contaminação é o carryover de amplicons gerados em reações anteriores; como a questão pede a medida indicada para prevenir essa contaminação, o critério decisivo é a segregação física entre etapas pré-PCR e pós-PCR, com fluxo unidirecional, o que sustenta a alternativa E.Tema central: Contaminação em PCRAnálise das alternativasAErradaEstá errada porque mistura uma boa prática acessória com uma conduta tecnicamente inadequada. Ponteiras com filtro ajudam a reduzir aerossóis, mas irradiar por UV componentes da reação, incluindo Taq polimerase e primers, pode degradar ou inativar esses reagentes. Portanto, a alternativa não descreve uma medida apropriada de prevenção dessa forma.BErradaEstá errada porque confunde conservação/transporte de amostra com prevenção da contaminação da reação de PCR. Limpeza com hipoclorito é útil para descontaminação de superfícies, mas o transporte em meio viral ou salina tamponada não é o critério central de controle de contaminação da reação. A pergunta exige a medida principal contra contaminação no PCR convencional, que é a segregação física das etapas.CErradaEstá errada porque combina uma estratégia que pode ser usada em certos sistemas anti-carryover, a uracil-N-glicosilase, com ajustes de otimização analítica que não previnem contaminação ambiental. Reduzir primers e MgCl2 interfere em eficiência e especificidade da reação, mas não elimina a fonte de contaminação cruzada por amplicons. Além disso, essa alternativa não traz a medida estrutural principal exigida pela questão.DErradaEstá errada porque descreve desenho de ensaio, não controle de contaminação. Usar mais de um conjunto de primers corresponde à detecção de múltiplas regiões de um alvo, ou multiplexação, o que é estratégia analítica e não medida de biossegurança molecular. Isso não reduz o risco de carryover de amplicons.ECertaA alternativa E descreve a medida estrutural padrão e mais eficaz para prevenir contaminação no PCR convencional: separar fisicamente as áreas de preparo da amostra, preparo da reação, amplificação e detecção do produto. Isso impede que produtos amplificados, principal fonte de contaminação, retornem às etapas limpas do processo. Medidas acessórias podem ajudar, mas não substituem essa segregação entre pré-amplificação e pós-amplificação.Pegadinha da questãoA banca misturou medidas acessórias verdadeiras, como ponteiras com filtro, hipoclorito e UNG, com elementos inadequados ou deslocados do núcleo da pergunta, para induzir confusão entre boas práticas pontuais e a medida decisiva: separação física entre áreas pré-PCR e pós-PCR.Dica para questões semelhantesEm PCR convencional, pense primeiro na principal fonte de contaminação: amplicons de reações anteriores.Quando a pergunta pedir a melhor medida preventiva, priorize segregação física das etapas e fluxo unidirecional, não ajustes finos da mistura reacional.Se a alternativa mistura uma medida correta com outra tecnicamente inadequada, o item fica incorreto no conjunto.Não confunda transporte de amostra ou desenho do ensaio com controle estrutural de contaminação da reação.

O PCR convencional é uma técnica de alta sensibilidade suje...

Gabarito comentado

Gabarito: E

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